土耳其斯坦东毕吸虫28S LSU序列扩增与分析 毕业论文.docVIP

土耳其斯坦东毕吸虫28S LSU序列摘要：目的 PCR扩增并测定黑龙江省大庆地区牛源土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）核糖体28S LSU序列，构建分子进化树，探讨土耳其斯坦东毕吸虫在裂体科中的分类地位。方法 以SDS-蛋白酶K法抽提土耳其斯坦东毕吸虫基因组DNA，应用特异引物PCR扩增28S LSU序列，产物经纯化后连接到pMD18-T载体，克隆并测序，并构建土耳其斯坦东毕吸虫分子进化树。结果 土耳其斯坦东毕吸虫的28S LSU序列为1 304 bp，构建的进化树显示土耳其斯坦东毕吸虫处于裂体属内，同时处于非洲血吸虫种群。结论 土耳其斯坦东毕吸虫应归属于裂体属。 关键词：土耳其斯坦东毕吸虫；28S LSU序列；进化树；分类 28S LSU sequence of Orientobilharzia turkestinicum amplified and construction phylogentic tree’sAbstract: Objective The 28S rDNA-LSU（28S ribosomal DNA large-subunit sequences）of Orientobilharzia turkestinicum from cattle were amplified by PCR and cloned into pMD18-T easy vector and then sequenced, counstucted phylogeny tree then determined the molecular phylogeny. Methods Genomic DNA was extracted from parasites isolated from individual host by SDS-proteinase K method. The 28S LSU sequence were amplified by PCR and cloned into pMD18-T vector and then sequenced. Phylogenic trees were generated using the MEGA 3.1 software. Results 28S LSU were 1 304 bp. Phylogenetic analyses based on the 28S LSU sequence revealed that O. turkestanicum is placed within the schistosoma and belong to African schistosomes group. Conclusion O. turkestanicum should be considered a species belong to Schistosoma. Key words: Orientobilharzia turkestanica, 28S LSU, phylogentic tree, position 目录 前 言 1 材料与方法 1 1.1 试验材料 1 1.2 试验方法 2 2 结果 5 2.1 28S LSU序列的扩增 5 2.2 重组质粒DNA的鉴定 5 2.3 目的基因测序结果 6 2.4 基于土耳其斯坦东毕吸虫28S LSU序列构建的进化树 7 3 讨论 8 9 参考文献 致 谢 1 附 录 1 前言 土耳其斯坦东毕吸虫（Orientobilharzia turkestanicum）是寄生于牛、羊等多种动物门静脉和肠系膜静脉的一种血吸虫。它与所在属内的其它血吸虫导致的疾病称为东毕吸虫病，主要分布于亚洲和欧洲的一些地区，常呈地方性流行，对畜牧业危害十分严重[1-5]。其尾蚴可引起人的尾蚴性皮炎（也称稻田皮炎），是北方尾蚴皮炎病原之一。 目前，关于东毕吸虫的分类主要基于成虫和虫卵形态特征、中间宿主特异性、尾蚴逸出周期性、潜伏期、产卵量、致病性和免疫性以及地理分布等传统的分类方法，但传统的分类不能全面地反映血吸虫种系发生的遗传变异关系。近年来，随着PCR技术及现代分子生物学技术的发展，为寄生虫的分类及研究虫种间的进化关系提供了新的研究方向和研究方法。因此，本研究选用黑龙江省大庆地区牛体内分离的土耳其斯坦东毕吸虫，PCR扩增28S 大亚基LSU序列（28S LSU）并构建进化树，讨论其系统发生情况，为今后研究土耳其斯坦东毕吸虫的分类、起源和裂体科血吸虫的系统发生奠定基础。1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 虫体来源 剖检自然感染东毕吸虫病的黄牛，于肠系膜静脉中挑取虫体，（Orientobilharzia turke