11基因工程的工具精要.pptVIP

你知道胰岛素如何生产吗？ 胰岛素是能够降低人体血糖浓度的唯一激素，也治疗胰岛素依赖型糖尿病的唯一特效药； 从1吨猪胰脏中只能提取10g胰岛素； 现在生产胰岛素的方法：细菌表达！ 你对基因工程的认识 通过基因工程技术可以实现什么目标？ 基因工程的操作对象是什么？ 是在什么水平上操作？ 基因工程 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术。 基因工程的理论基础 DNA是遗传物质的证明 ： 生物的主要遗传物质是DNA，细菌转化实验还证明DNA可以从一种生物体转移到另一种生物个体。 DNA双螺旋结构： 所有生物的DNA都是双螺旋结构，为把不同生物的DNA拼接在一起提供理论依据。 中心法则的确立： 阐明生物遗传信息流动的方向。 遗传密码的破译： 从微生物到人类共用一套遗传密码，为外源基因在受体细胞中成功表达提供理论依据。 基因工程的技术基础 基因转移载体的发现：质粒 工具酶的发现：限制酶、连接酶、逆转录酶 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现：两种病毒的DNA体外重组 重组DNA表达实验的成功：实现了物种间基因交流 第一例转基因动物的问世：转基因小鼠 PCR技术的发明：体外扩增DNA 技术 将噬菌体转移于B品系大肠杆菌时不能繁殖 1968年，两位科学家从B品系大肠杆菌中发现一种酶----可识别特定的脱氧核苷酸序列，并切割外源DNA分子。 一、限制性内切酶（分子手术刀） 二、DNA连接酶（分子缝合针） pBR322质粒结构 三、基因进入受体细胞的载体（分子运输车） 体外重组DNA要点 用同种限制性内切酶处理目的基因和运载体，得到相同的黏性末端 用DNA连接酶将目的基因与运载体的黏性末端连接，组成重组运载体 理想结果： 运载体的特点1： 能进入并在宿主细胞内稳定保存并大量复制； 自然界生物可以将自身的遗传物质注入 其他生物体内，并进行复制表达？ 常用的运载体：质粒、病毒 细菌的质粒：自主复制的双链、闭合、环状DNA分子； 可以在细胞间转移 除细菌质粒外，还有酵母菌质粒等 质粒：在细菌中存在的能自主复制的双链DNA分子，是一种特殊的独立于染色体之外存在的遗传物质。 ？ 重组质粒 DNA连接酶 受体细胞 运载体的特点2： 有限制酶酶切位点 相同限制酶 …… CTTAA G CTTAA G CTTAA G CTTAA G 目的基因 目的基因所在片段 运载体 PStⅠ DNA连接酶 重组DNA 运载体自连 目的基因 自连 CTTAA G CTTAA G CTTAA CTTAA G G PSt Ⅰ 运载体的特点3： 有标记基因 如果外源DNA插入，氨卞青霉素抗性基因失活 标记基因 进行筛选 限制性内切酶 识别序列 外源基因连接 PStⅠ PStⅠ 自主复制 运载体应具有多个标记基因，有利于进行筛选 利用拓印法选择出缺少抗氨苄青霉素能力的大肠杆菌。 培养基中加氨苄青霉素 具有抗氨苄青霉素能力的菌落 选择出没有抗氨苄青霉素能力的工程菌 没有抗氨苄青霉素能力的菌落被淘汰 （1）作用：将目的基因导入受体细胞，并大量复制。 （2）具备的条件： A、能在宿主细胞内复制并稳定地保存； B、具有多个限制酶切点，以便于插入目的基因； C、具有某些标记基因，便于筛选和鉴定。 （3）种类：质粒（细菌和酵母菌）、噬菌体和动植物病毒。 操作 运载体（质粒） ＋ DNA分子 一种限制性内切酶 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 重组DNA分子（重组质粒） DNA连接酶 体外重组DNA的基本方法 目的基因 复制起点 标记基因1 标记基因2 标记基因3 重组DNA （重组质粒） * 这些有可能成为考点 刚才我们所探讨的工作，都是在分子水平上进行的，切割也好，连接也好，转移也好，无一例外。中国有句俗语叫“没有金刚钻儿，不揽瓷器活儿”。科学家们在实施基因工程之前，苦苦求索，终于找到了实施基因工程的三种“金刚钻儿”，使基因工程的设想成为了现实。这三种“金刚钻儿”，一是准确切割DNA的工具，“分子手术刀”──限制酶；二是DNA片段的连接工具，“分子缝合针”──DNA连接酶；三是基因转移工具，“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体。下面我们就来学习这方面的内容。 问：此过程是发生在细胞中的代谢反应，哪种物质可使其分解呢？ 形成的重组质粒可以导入受体细胞，质粒可带着目的基因进行复制和表达 问：DNA连接酶加入后，得到的一定是重组质粒吗？ hd 选修3 现代生物科技专题专题1 基因工程 斑马鱼 转基因荧光斑马鱼