甘薯品种（系）抗瘟鉴定方法.doc

全国甘薯区试甘薯抗病鉴定方法 甘薯黑斑病抗性鉴定： 采用针刺接种法鉴定块根对甘薯黑斑病（Ceratocystis fimbriata Ellis et Halsted）的抗性强弱。 对照品种：以中度感病品种冲绳100号（胜利百号）作参照。 鉴定方法： 1、鉴定材料的繁殖：采用常规甘薯种植方法繁殖所有的鉴定材料。在收获时每个供试品种选取3块中等大小、表面光滑、无伤烂的薯块，仔细洗净，晾干，编号后待用。 2．接种器具的准备： （1）接种针的准备： 取8号医用针头，将学生用橡皮切0.5*0.5见方的小块，再将针头从小块橡皮中心插入，用尺子量取针尖至橡皮的距离，确定为0.5cm。 （2）其它物品的准备：消毒一批培养皿、手术刀、剪刀、解剖针、镊子和无菌水备用。 3．病菌分离与保存：①可按常规方法分离致病力强的病菌株系，接种于PDA培养基上，置于冰箱保存。当年分离的病菌当年用，不宜保存时间过长，否则病菌的致病力会下降。②或用当年收挖薯块时田间采集的带病薯块作为室内黑斑病菌分离标样。病标样分离时洗去薯块表面泥土，并用75%酒精进行表面消毒，在超净工作台上将病斑表皮去除，再切取病斑部放入容器内捣碎。加适量水兑成黑斑病孢子悬浮溶液。 按上述两种方法获得黑斑病孢子悬浮溶液后，再选择无病斑薯块洗净切成厚约1cm的薯片，大小以薯块大小定，把切好的薯片放入配好的孢子悬浮液内浸一下，取出薯片晾干表面水分，再放入准备好的经消毒过的10cm直径的培养皿内（培养皿内垫有保湿纸，再在保湿纸上垫细玻璃管架），盖上培养皿，在25℃恒温培养箱内保持相对湿度95%以上培养至薯片表面长满浅灰色的分生孢子，约5～6d。 待薯片长满灰白色的分生孢子后，用无菌水冲洗，配成浓孢子悬浮液备用。将浓孢子悬浮液稀释为1×107 个孢子/ml（或显微镜160倍下每视野40-60个孢子）的悬浮液备用。 3．接种方法与抗性鉴定： 用医用注射针头蘸取配好的菌液，穿刺测试的薯块进行接种，每个薯块接种15个点（注意：每针刺1次，针头需蘸取菌液），深度0.5cm。接种后的薯块装入消毒的塑料箱中，加盖消毒纱布，置于25-28℃的恒温室中，每天上午、下午各用温水浇湿覆盖纱布一次进行保湿。培养10d后，切开薯块测量病斑直径和深度，计算平均病斑直径和平均深度，与对照品种胜利百号相比判定抗性（注意：与本箱对照相比）。抗病表现百分率按以下公式计算。 抗病表现百分率= 供试品种病斑平均直径2×供试品种病斑平均深度 ×100 对照品种病斑平均直径2×对照品种病斑平均深度 抗病表现百分率单位为%，精确到0.1%。 根据抗病表现百分率将甘薯黑斑病抗性分为五级。 高抗（抗病表现百分率≤40） 抗病（40＜抗病表现百分率≤80） 中抗（80＜抗病表现百分率≤120） 感病（120＜抗病表现百分率≤160） 高感（160＜抗病表现百分率） 抗性至少为两年一致的鉴定结果，若不一致以抗性差的为准。  甘薯根腐病抗性鉴定： 采用田间自然诱发的方法鉴定甘薯品种对甘薯根腐病（Fusarium solani(Mart.) Sacc.f.sp.batatas McClure）的抗性强弱。 对照品种：抗病品种：徐薯18、感病品种：胜利百号 鉴定方法：在重病地进行自然诱发鉴定，参试品种于每年6月初栽插于自然诱发鉴定病圃中。每个品种栽5株，三次重复。栽插后40天调查地上部发病情况，并按分级标准分级，计算地上部病情指数。在10月下旬收获并根据分级标准调查地下部发病情况。计算地下部病情指数。根据地上、地下部病情指数的平均值确定品种抗性。 地上部分级标准： 0级：看不到病症； 1级：叶色稍发黄，其它正常； 2级：分枝少而短，叶色显著发黄，有的品种现蕾或开花； 3级：植株生长停滞，显著矮化，不分枝，老叶自下向上脱落； 4级：全株死亡。 薯块病级按以下标准确定： 0级：薯块正常无病症 1级：个别根变黑（病根数占总根数的10%以下），地下茎无病斑，对结薯无明显影响。 2级：少数根变黑（病根数占总根数的10-25%），地下茎及薯块有个别病斑，对结薯有轻度影响。 3级：近半数根变黑（病根数占总根数的25.1-50.0%），地下茎和薯块病斑较多，对结薯有显著影响，有柴根。 4级：多数根变黑（病根数占总根数的50以上%），地下茎病斑多而大，不结薯，甚至死亡。 病情指数按以下公式计算。 病情指数单位为%，确定到0.1%。 根据病情指数确定种质甘薯根腐病抗性。 高抗(病情指数≤20) 抗病（20＜病情指数≤40） 中抗（40＜病情指数≤60） 感病（60＜病情指数≤80） 高感(80＜病情指数) 抗性