14第一章病毒精要.ppt

2、系列稀释终点 方法： 病毒系列稀释—细胞培养—观察细胞病理效应 病毒系列稀释—敏感动物—病变或死亡 滴度： TCLD50（ 50% 发生病理效应）（对于细胞培养） ID50（50%病变）, （对于敏感动物培养） LD50（50%死亡）（对于敏感动物培养） (二) 噬菌体的分离培养 双层琼脂法培养： 1.制底层平板 倒琼脂培养基，凝固，烘干平板上的水分。 2.制上层平板 宿主菌+软琼脂培养基(融化并冷至45℃)+0.1 mL噬菌体样品，摇匀后全部倒入，使铺满整个琼脂平板上，凝固后，于一定温度的恒温箱中倒置培养；经培养一定时间后，取出计数。 第五节 病毒对物理、化学因素、抗生素的抵抗力及在污水处理过程中的去除效果 一、病毒对物理因素的抵抗力 （一）温度 1.高温 病毒大多数在55～65℃范围内55~60摄氏度时， 几或十几分钟被灭活。 一般情况下，高温使病毒的核酸和蛋白质衣壳受损伤，蛋白质的变性作用阻碍了病毒吸附到宿主细胞上，削弱了病毒的感染力。  2.低温 低温不灭活病毒，在-75℃保存病毒。天花病毒在鸡胚膜中冰冻15年仍存活，经冷冻真空干燥后可保存数月至数年。   （二）光及其他辐射 1.紫外辐射 紫外辐射具有灭活病毒的作用。其灭活的部位是病毒的核酸。 2.可见光 日光对肠道病毒有灭活作用 3.离子辐射 X 射线、γ射线也有灭活病毒的作用。 图1-10 紫外辐射对核酸的损伤 A.胸腺嘧啶二聚体结构 B. 尿嘧啶水合作用  (三) 干燥 干燥是控制环境中病毒的重要因素。在相对湿度较低时存活时间短。 二、病毒对化学因素的抵抗力 1.体内灭活的化学物质有抗体和干扰素 抗体：病毒（抗原）侵入活的有机体后，产生一种特异蛋白质（抗体）抵抗入侵的病毒。 干扰素：宿主抵抗入侵的病毒而产生的一种糖蛋白即干扰素，它进而诱导宿主产生一种抗病毒蛋白将病毒灭活，干扰素起间接作用。 2.体外灭活的化学物质 酚—破坏衣壳蛋白 甲醛—破坏核酸 亚硝酸—破坏核酸，碱基脱氨基作用 氨——RNA裂解 醚类、十二烷基硫酸钠、氯仿、去氧胆酸钠——脂溶剂，破坏脂质被膜 乙醇——蛋白质脱水剂 强酸、强碱、pH： 强酸、强碱灭活病毒。 高pH值灭活病毒，破坏蛋白质衣壳和和核酸。 pH6.0~8.0 ：稳定， pH5以下或pH9以上：迅速失活； pH 11以上 严重破坏病毒。 氯(或次氯酸、二氧化氯、漂白粉)、溴、碘、臭氧——氧化剂 氯(或次氯酸、二氧化氯、漂白粉)和臭氧灭活病毒的效果极好，它们对病毒蛋白质和核酸均有作用， 病毒对氯的耐受力比肠道致病菌强，甲型肝炎病毒用氯消毒需浓缩三倍，游离氯浓度维持在1mg/L。  三、病毒对抗生素的抵抗力 链霉菌、青霉菌产生的抗生素对大多数病毒无灭活作用，只有鹦鹉-淋巴肉芽肿病毒例外。 藻类产生的抗生物质如丙烯酸和多酚对病毒有灭活作用。 四、病毒在环境中的存活和在污水  处理过程中对病毒的去除效果 （一）病毒在环境中的存活 1. 水体中病毒的存活 在海水中： 在3～5℃时，肠道病毒滴度下降99.9％所需要的时间为40～90d，22～25℃时，需要2.5～9d，37℃只需5d。 在湖水和河水中： 在3～6℃时，肠道病毒传染性效价损失103 所需时间是 7～67d。在18～27℃时，只需3～10d。 在水体淤泥中：病毒吸附在固体颗粒上或被有机物包裹在颗粒中间，因为受到保护其存活时间会较长些。  2. 在土壤中病毒的存活时间 土壤是很好的过滤层。有净化污染物的功能。 低温时的存活时间比在高温时长。 干燥易使病毒灭活，土壤水分含量在10％以下，病毒的数量大减。 病毒在土地处理场中可存活6个月以上。 空气中病毒的存活时间受干燥程度、相对湿度、太阳光中的紫外辐射、温度和风速等的影响。 相对湿度越大病毒存活时间越长；相对湿度越小，越干燥，病毒存活时间越短。 3. 空气中病毒的存活 （二）污水处理过程中对病毒的去除效果 一级处理:物理过程，去除病毒约30％。 二级处理:生物处理方法，对污水中病毒的去除率较高，去除病毒率在90%～99%。 三级处理:继生物处理后的深度处理，有生物和化学及物理的处理过程。它包括絮凝、沉淀、过滤和消毒（加氯