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Agilent化学工作站讲义 主要内容 预备知识：色谱峰、色谱的定性与定量 Agilent化学工作站的使用 实际演练 TL色谱工作站的使用 实际演练 色谱流出曲线及有关术语 （一）色谱流出曲线和色谱峰 由检测器输出的电信号强度对时间作图，所得曲线称为色谱流出曲线。曲线上突起部分就是色谱峰。 如果进样量很小，浓度很低，在吸附等温线（气固吸附色谱）或分配等温线（气液分配色谱）的线性范围内，则色谱峰是对称的。 色谱流出曲线及有关术语 （二）基线 在实验操作条件下，色谱柱后没有样品组分流出时的流出曲线称为基线，稳定的基线应该是一条水平直线。 （三）峰高 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以（h）表示。 色谱流出曲线及有关术语 色谱流出曲线 色谱流出曲线和色谱峰 基线（a） 峰高（h） 色谱流出曲线及有关术语 （四）保留值 1. 死时间t0 不被固定相吸附或溶解的物质进入色谱柱时，从进样到出现峰极大值所需的时间称为死时间，它正比于色谱柱的空隙体积，如下图。 色谱流出曲线及有关术语 因为这种物质不被固定相吸附或溶解，故其流动速度将与流动相流动速度相近。测定流动相平均线速ū时，可用柱长L与t0的比值计算，即 ū = L/t0 2. 保留时间tr 试样从进样到柱后出现峰极大点时所经过的时间，称为保留时间，如下图。 色谱流出曲线及有关术语 3. 调整保留时间tr′ 某组分的保留时间扣除死时间后，称为该组分的调整保留时间，即 tr′= tr ? t0 由于组分在色谱柱中的保留时间tr包含了组分随流动相通过柱子所须的时间和组分在固定相中滞留所须的时间，所以tr实际上是组分在固定相中保留的总时间。 保留时间是色谱法定性的基本依据，但同一组分的保留时间常受到流动相流速的影响，因此色谱工作者有时用保留体积来表示保留值。 色谱流出曲线及有关术语 4. 死体积V0 指色谱柱在填充后，柱管内固定相颗粒间所剩留的空间、色谱仪中管路和连接头间的空间以及检测器的空间的总和。当后两相很小可忽略不计时，死体积可由死时间与色谱柱出口的载气流速Fco（cm3·min-1）计算。 V0 = t0Fco 式中 Fco为扣除饱和水蒸气压并经温度校正的流速。 仅适用于气相色谱，不适用于液相色谱。 色谱流出曲线及有关术语 5. 保留体积Vr 指从进样开始到被测组分在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相的体积。保留时间与保留体积关系： Vr= tr Fco 6. 调整保留体积Vr? 某组分的保留体积扣除死体积后，称为该组分的调整保留体积。 Vr? = Vr ? V0 = tr? Fco 色谱流出曲线及有关术语 7. 相对保留值r2,1 某组分2的调整保留值与组分1的调整保留值之比，称为相对保留值。 r2,1= tr2 ? / tr1′= Vr2? / Vr1? 由于相对保留值只与柱温及固定相性质有关，而与柱径、柱长、填充情况及流动相流速无关，因此，它在色谱法中，特别是在气相色谱法中，广泛用作定性的依据。 色谱流出曲线及有关术语 在定性分析中，通常固定一个色谱峰作为标准（s），然后再求其它峰（i）对这个峰的相对保留值，此时可用符号?表示，即 ? = tr ?(i) / tr ? (s) 式中tr ?(i)为后出峰的调整保留时间，所以?总是大于1的。相对保留值往往可作为衡量固定相选择性的指标，又称选择因子。 (五) 区域宽度 色谱峰的区域宽度是色谱流出曲线的重要参数之一，用于衡量柱效率及反映色谱操作条件的动力学 色谱流出曲线及有关术语 因素。表示色谱峰区域宽度通常有三种方法。 1. 标准偏差? 即0.607倍峰高处色谱峰宽的一半。 2. 半峰宽W1/2 即峰高一半处对应的峰宽。它与标准偏差的关系为 W1/2=2