lisa的免疫学实验(凝集反应)概要.ppt

免 疫 学 实 验 Lisa 实 验 内 容 凝集反应：试管凝集实验（操作）； 沉淀反应： 双向琼脂扩散实验（示教） 火箭电泳（示教） 实验原理 1.什么是抗原抗体反应（antigen-antibody reaction） 抗原和抗体的特异性结合反应 体内 产生保护效应 造成病理损伤 体外 多种表现形式:凝集,沉淀,补体结合,中和等. 2.抗原抗体作用的基本原理 抗原和抗体分子结构及立体构型的互补 抗原-抗体结合力 疏水作用,氢键,范德华引力,静电吸引作用 3.抗原抗体反应的基本特点 （1）特异性——是血清学诊断的依据 抗原决定簇－超变区的结合高度特异性 （2）可逆性 一定条件下（低pH、高浓度盐、冻融等） →抗原-抗体可被解离 （3）最适比例  反应体系中抗原/抗体最适比例 →决定反应结果的关键因素 4. 影响抗原抗体反应的因素 （1） 反应物自身因素 a. 抗体 * 来源 * 特异性与亲和力 * 浓度 b. 抗原 * 理化性质、表位多寡和种类 (2) 环境条件 a. 电解质 不可缺少 b. 酸碱度 pH 6-9 c. 温度 15-40摄氏度 d. 时间 规定时间 5. 应用范围 用已知抗原检测未知抗体 用已知抗体检测未知抗原 大分子物质 药物、激素和炎性介质等各种半抗原物质 1. 沉淀反应（Precipitation） 2. 凝集反应（Agglutination） 常见抗原抗体反应的类型： 凝 集 反 应 实验内容： 1. 试管凝集反应（Agglutination） 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结合 →肉眼可见的凝集物 * 方法 直接凝集、间接凝集、间接凝集抑制试验 凝集反应(agglutination) 实验原理 直接凝集试验－原理：细胞(组织细胞、细菌）＋相应抗体  细胞凝集 一定条件下 间接凝集抑制试验 此次试验内容 试管凝集反应（肥达反应） 实验材料 伤寒杆菌菌液 伤寒杆菌免疫血清 生理盐水，吸管，试管等 操作方法（每组分为两小组，第一组……） 1、取洁净试管6支，依次标明号码。 2、第一管加入生理盐水 0.5毫升， 于2—6管内加生理盐水0.5毫升。 1 2 3 4 5 6 0.9ml 0.5ml 3、再用吸管取1:10伤寒杆菌免疫血清0.1毫升加入第一管，充分混合均匀后（吸上吸下三次），吸出0.5毫升血清（1：20）移入第二管，然后依次稀释至第五管，最后弃去0.5毫升，血清稀释度依次为1：20、1：40、1：80、1：160及1：320。第六管为抗原对照（不加血清）。 1 2 3 4 5 6 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:100.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 0.5ml 弃去 对照管 4、用吸管加伤寒杆菌菌液0.5毫升于各管中。 5、将各管震荡混匀，放37°C温箱中过夜。 1 2 3 4 5 6 倍比稀释浓度： 1：20 1：40 1：80 1：160 1：320 终浓度： 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照管 0.5ml 【结果判断】 （1）观察方法：观察顺序为先观察第6管生理盐水对照，试管中应无凝集现象， （2）凝集程度：根据凝集反应的程度，分别用以下符号表示： ++++：管内液体澄清透明，细菌完全被凝集于管底，轻摇后可见大片的凝集块。 +++：管内液体轻度浑浊，大部分细菌凝集于管底，摇起后见凝集块较小。 ++：管内液体中度浑浊，部分细菌被凝集于管底，凝集仍较明显，呈颗粒状或小片状。 +：管内液体很浑浊，仅有少量细菌被凝集沉于管底。 -：管内液体与对照相同，无凝集现象。 （3）效价判