DNA的复制与修复概要.ppt

DNA的复制与修复 基因(gene) 是生命体遗传信息的传递体，是编码生物活性产物（蛋白质或各种RNA）的DNA功能片段，其功能的体现遵循中心法则。 1958年，F.Crick提出中心法则： 后来人们又发现，在宿主细胞中一些RNA病毒能以自己的RNA为模板复制出新的病毒RNA，还有一些RNA病毒能以其RNA为模板合成DNA，称为逆转录这是中心法则的补充。 第一节 DNA的复制 一、DNA的半保留复制 1.概念： DNA在复制时，两条链解开分别作为模板，在DNA聚合酶的催化下按碱基互补的原则合成两条与模板链互补的新链，以组成新的DNA分子。这样新形成的两个DNA分子与亲代DNA分子的碱基顺序完全一样。由于子代DNA分子中一条链来自亲代，另一条链是新合成的，这种复制方式称为半保留复制。 2.DNA的半保留复制实验依据 1958年Meselson stahl用同位素示踪标记加密度梯度离心技术实验,证明了DNA是采取半保留的方式进行复制. 二.DNA复制的起始点与方向 1.复制起点（origin ori或o复制原点） ： DNA复制都是在特定起始部位开始。这一特异部位称为Ori。 大多数原核生物基因组和细菌质粒只有一个Ori位点，而真核生物染色体中有多个Ori。 Ori是以一条链为模板起始DNA合成的一段序列。一般由100-200个碱基对组成，富含A.T。 1983年，Zyskind等人比较了6种不同种类的细菌染色体复制起点的DNA序列（包括E.coli、鼠伤寒沙门氏菌、肝炎杆菌和一种海洋细菌等），发现它们具有共有序列, 包括二个必需区域：一个是9bp重复序列，重复出现4次，能与起始蛋白DnaA特异结合，对于DNA复制的起始十分重要；另一个是3个连续出现的13bp序列，富含A和T，有利于双螺旋DNA局部解旋并暴露两条复制模板链。 细菌的Ori结构特点： 串联重复序列(tandem repeat): A-T 回文结构(palindrome) 复制子:基因组中能单独进行复制的单位。每个起始点到终止点的区域为一个复制子。 单复制子:　一般原核生物细胞 多复制子：真核生物细胞核DNA。 2.DNA复制的方式 双向复制：大多数（等速进行或异速进行），形成两个复制叉。 单向复制：少数，形成一个复制叉。 复制叉----复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，形成在显微镜下可看到的叉状结构，称为复制叉。 复制眼（replication eye）：电子显微镜下观察正在复制的DNA,复制的区域形如一只眼睛. DNA复制的方式 原核生物的染色体和质粒、真核生物的细胞器DNA都是环状双链分子，它们都是单复制子，都在一个固定的起点开始复制，复制方向大多数是双向的，少数是单向复制。 多数是对称复制，少数是不对称复制（一条链复制后才进行另一条链的复制）。 （1） 比较形象的－－θ 复制 ZP41 双链环状DNA的复制眼可以形成一种θ结构，形状像希腊字母θ.称θ形复制 （2） D-环型（D-loop）：? 这也是一种单向复制的特殊方式。这种方式首先在动物线粒体DNA的复制中被发现。双链环在固定点解开进行复制。但两条链的合成是高度不对称的，一条链上迅速合成出互补链，另一条链则成为游离的单链环（即D-环）。 （2）D 环复制 （不对称复制 ） 线粒体和叶绿体DNA的复制方式。 ZP43图2-22 WP411图34-8 （3）共价延伸方式或滚环式复制 这是单向复制的特殊方式。如ΦX174的双链环状DNA复制型（RF）就是以这种方式复制的。DNA的合成由对正链原点的专一性切割开始，所形成的自由5’端被从双链环中置换出来并为单链DNA结合蛋白所覆盖，使其3’—OH端在DNA聚合酶的作用下不断延伸。 复制反应可看成生长点沿着环状的模板链滚动。在这个过程中，单链尾巴的延伸与双链DNA的绕轴旋转同步。 复制一圈，就产生单位长度的线性DNA链，复制继续进行，可产生多单元线性DNA链。 真核生物的染色体DNA是线形双链分子，含有许多复制起点，因此是多复制子，每个复制子约有100-200Kbp。人体细胞平均每个染色体含有1000个复制子。 DNA聚合酶催化的链延长反应 第二节.原核生物DNA的复制 一.复制有关的酶 （一）.大肠杆菌DNA聚合酶 1. DNA聚合酶I 单体酶，分子量109Kd，含一个Zn2+，每个细胞中含400个DNA pol.Ⅰ （1）5’ → 3’ 聚合活性：与模板链结合，按碱基互补原则，催化3’5’磷酸二酯键的形成。但只能延伸DNA链。 （2）3’ → 5’ 外