DNA重组技术与基因工程概要.pptVIP

基因（gene）: DNA分子中含有特 定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质最小功能单位。 基因工程（geneome）:重组DNA技术是指分离纯化或人工合成的基因（目的基因）与载体在体外进行拼接重组，然后转入宿主细胞（细菌或其他细胞）内，筛选出携带有重组DNA的活宿主细胞，再使之繁殖和扩增，直至表达出目的基因所编码的多肽。由于这一过程类似于一个连续和复杂的工程，所以又称为基因工程。DNA重组体外引入受体细胞（宿主细胞），进行无性繁殖和扩增的过程称为基因克隆技术。 基因工程技术的诞生 基因工程技术的诞生不仅依赖于基因分子生物学理论的发展，同时也有赖于一些重要的分子生物学研究方法的建立。最重要的技术准备是限制性酶的分离纯化、DNA连接酶的分离、大肠杆菌转化技术的突破。到1970年，这三大技术都已经建立，“万事齐备，只欠东风”了。到了1972～1973年，两位科学助产士Berg和Cohen将基因工程接到了人间。 ?第一个重组体的构建 1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40:circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，标志着基因工程技术的诞生。 ?第一个有功能重组体的构建 ◆虽然Berg的工作具有划时代的意义，但是他们并没有证明体外重组的DNA分子具有生物学功能。 ◆1973年，S.N.Cohen等在美国PNAS上发表了题为“Construction of Biologically Functional Bacterial Plasmid In Vitro” （S. N. Cohen, A. C. Y. Chang, H. W. Borer, and R. B. Helling, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70:3240-3244, 1973） 的论文，宣布体外构建的细菌质粒能够在细胞中进行表达,从而完善了Berg开创的基因重组技术。 ◆质粒 pSC101的获得 ●In 1972, Cohen constructed a new plasmid beginning with DNA isolated from E. coli. Cohen named the plasmid pSC101 (“SC for Stanley Cohen).The new plasmid had three important features: it had only a single recognition site where EcoRI would cut the molecule, thus identifying the spot where the plasmid would open; (2) it had a sequence of nucleotides called an origin of replication, which is needed to initiate DNA replication; such a sequence stimulates plasmids to multiply in a host organism; (3) it contained a gene for resistance to the antibiotic tetracycline; thus, bacteria having the plasmid could resist the effects of tetracycline, whereas bacteria lacking the plasmid would be killed by the tetracycline. ◆质粒 pSC101对大肠杆菌的转化技术突破 ● Another key characteristic of Cohens plasmid was the ease of inserting it to a host cell. Cohen found that he could insert plasmids to fresh bacteria by suspending the latter in cold calcium chlorid