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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * On binding to the transpeptidase, the serine residue at the active site attacks the carbonyl carbon atom of the lactam ring to form the penicilloyl-serine derivative（衍生物） 过渡态类似物 过渡态是底物和酶结合成中间复合物后被活化的过渡形式，由于能障小，和酶结合就紧密得多。 因此过渡态类似物与酶的亲和力就会远远大于底物，引起酶的强烈抑制 pro消旋酶 抑制剂与酶分子上的某些必须基团反应，引起酶活力下降甚至丧失，使酶反应速度降低。 根据抑制剂与酶的作用方式及抑制作用是否可逆，将抑制作用分为不可逆抑制作用和可逆抑制作用。 抑制作用的类型 如二异丙基氟磷酸(DIPF)能够与胰凝乳蛋白酶活力中心的丝氨酸残基反应，形成稳固的共价键，因而抑制酶的活性。 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 (1)竞争性抑制作用 有些抑制剂和底物结构极为相似，可和底物竞相与酶结合，当抑制剂与酶结合后，就妨碍了底物与酶的结合，减少了酶的作用机会，因而降低了酶的活力。这种抑制作用叫竞争性抑制作用。 常见的竞争性抑制剂 如对氨基苯磺酰胺(磺胺药) Vmax 不变，Km增大。 非竞争性抑制作用 Km不变,Vmax变小 反竞争抑制作用 Km Vmax 4 温度对酶反应的影响 5 pH 对酶反应的影响 ①无机离子 K+、Mg2+、Ca2+、Zn2+、Mn2+、CI-、Br-等可作为酶的辅助因子的成分，或作为酶的激活剂。具有一定的选择性或拮抗作用；激活作用与离子浓度有关。 ②小分子有机物 如半胱氨酸、还原型谷胱甘肽、巯基乙醇等还原剂（酶分子中-S—S-还原为-SH)以及金属螯合剂，如EDTA(除去重金属，解除其对酶的抑制）。 ③具有蛋白质性质的大分子物质 某些酶可作为激活剂来激活酶原：指可对某些无活性的酶原作用的酶，如胰蛋白酶原受肠激酶作用后被激活。 6 激活剂对酶反应的影响 对可逆的酶促反应，产物浓度增加，正反应速度下降而逆反应速度增加。 在一系列的酶促反应中，其最终产物的浓度增加，往往对系列反应中催化第一步反应的酶或处于系列分叉处的酶有抑制作用，称之为反馈抑制（feed back inhibition）。 产物浓度对酶促反应速度的影响 * * * * * * * * * * * 生物化学Biochemistry 任课教师: 范三红 E-mail: sanhong.fan@ 酶促反应动力学 ENZYME KINETICS Chapter 7 激活剂 底物浓度 酶浓度 温度 pH 抑制剂 1 化学动力学基础 2 底物浓度对酶反应速率的影响 3 酶的抑制作用 4 温度对酶反应的影响 5 pH 对酶反应的影响 6 激活剂对酶反应的影响 酶促反应动力学Kinetics of enzyme-catalyzed reactions 1 化学动力学基础 酶促反应动力学中所指的速率是反应的初速率，因为此时反应速度与酶的浓度呈正比关系，这样避免了反应产物以及其他因素的影响。 酶促反应的速率（?），一般是以单位时间内底物被分解的量来表示（?mol/min、mg/min等）。 通过测定单位时间内底物的消耗量或产物的生成量可以得到酶促反应速率。 酶促反应的速率 [P] t 斜率=[P]/t=v 酶浓度 2 底物浓度对酶反应速率的影响 中间络合物学说 酶促反应动力学方程式 底物浓度 1913年，Michaelis和Menten根据中间产物学说，推导出了反应速度和底物浓度关系的数学方程式，即米氏方程。 酶促反应动力学方程式 当反应达到稳态时： V：某一底物浓度时的反应速度 Vmax：最大反应速度 [S]：底物浓度 Km：米氏常数（Michaelis constant） 当 V=1/2 VMAX Km=[S] Km单位为浓度单位。 米氏常数是酶的特征物理常数。一个酶在一定条件下，对某一底物的Km为一定值，故通过测定Km的数值，可鉴别酶。 如果一个酶可催化几个底物，对每个底物用一个Km。 Km越小，酶对底物的亲和力越大，反之已然。Km可表征酶对底物的亲和力。 3 酶的抑制作用 抑制剂 抑制作用的类型 可逆抑制作用动力学 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 酶的抑制作用的研究在新医药、新农药设计、了解酶的活性中心、酶的作用机理以及确定代谢途径等都有重要意义。 凡能使酶的活性下降而不引起酶蛋白变性的物质称做酶的抑制剂（inhibitor，I）。很多