d第四章酶分子修饰重点分析.ppt

这类酶中不含有辅助因子。 如脲酶、一些蛋白酶、淀粉酶、酯酶和核糖核酸酶等。 * 目前应用于化妆品的修饰 SOD 产品是月桂酸修饰 SOD, 也是对 SOD 非活性部位赖氨酸中 E-NH2的修饰. 它具有稳定性强、 分子量小、 易吸收、无免疫原性及体内半衰期短等等特点, 可大大增强其祛斑、 抗皱、 抗衰老等功效. 目前应用于化妆品的修饰 SOD 产品是月桂酸修饰 SOD, 也是对 SOD 非活性部位赖氨酸中 E-NH2的修饰. 它具有稳定性强、 分子量小、 易吸收、无免疫原性及体内半衰期短等等特点, 可大大增强其祛斑、 抗皱、 抗衰老等功效. * Pepsinogen 胃蛋白酶 * Enteropeptidase 肠激酶 * Trypsin胰蛋白酶 * 大分子结合修饰的作用 通过修饰提高酶的催化效率 通过修饰可以增强酶的稳定性 通过修饰可以降低或消除酶蛋白的抗原性 从微生物、植物或动物中获得的酶对人体来说是一种外源蛋白质。当酶蛋白进入人体后，往往会成为一种抗原，刺激体内产生抗体；当这种酶再次进入体内时，产生的抗体就可与作为抗原的酶特异性的结合，使酶失去其催化功能。 通过酶分子修饰，使酶蛋白的结构发生改变，大大降低甚至消除酶的抗原性，从而保持酶的催化功能。 (3) 酶分子的侧链基团修饰 采用一定的方法（一般为化学法）使酶蛋白的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法。 可以用于研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响。在研究酶的活性中心中的必需基团时经常采用。 酶蛋白的侧链基团是指组成蛋白质的氨基酸残基上的功能团。主要包括氨基、羧基、巯基、胍基、酚基等。这些基团可以形成各种副键，对酶蛋白空间结构的形成和稳定有重要作用。侧链基团一旦改变将引起酶蛋白空间构象的改变，从而改变酶的特性和功能。 催化活性/非催化活性基团的修饰 对非催化基团修饰可改变酶的动力学性质，改变酶对特殊底物的束缚能力。 经常被修饰的残基是： 亲核的Ser、Cys、Met、Thr、Lys、His 亲电的Tyr、Trp 对催化活性基团可以通过选择性修饰侧链成分来实现氨基酸的取代。 常见基团的化学修饰反应：羧基 常见基团的化学修饰反应：氨基 常见基团的化学修饰反应：巯基 常见基团的化学修饰反应：咪唑基 常见基团的化学修饰反应：酚羟基 常见基团的化学修饰反应：胍基 常见基团的化学修饰反应：色氨酸吲哚基 (4) 酶蛋白主链修饰(肽链有限水解修饰) 利用酶分子主链的切断和连接，使酶分子的化学结构及其空间结构发生某些改变，从而改变酶的特性和功能的方法。 酶蛋白主链修饰主要是靠酶切/酶原激活法。 a、胃蛋白酶原的激活 b、胰蛋白酶原（trypsinogen）的激活 c、胰凝乳蛋白酶原（chymotrypsinogen）的激活 肽链上某个氨基酸的改变会引起酶的化学结构和空间构象的改变，从而改变酶的某些特性和功能。 将酶分子肽链上的某一个氨基酸置换成另一个氨基酸，从而改变酶的催化特性的修饰方法称为氨基酸置换修饰。 氨基酸置换修饰的作用 提高酶的催化效率 增强酶的稳定性 使酶的专一性发生改变 (5) 氨基酸置换修饰 氨基酸置换修饰的方法 氨基酸或核苷酸的置换修饰可以采用化学修饰方法，例如，Bender等成功地利用化学修饰法将枯草杆菌蛋白酶活性中心的丝氨酸转换为半胱氨酸，修饰后，该酶失去对蛋白质和多肽的水解能力，却出现了催化硝基苯酯等底物水解的活性。但是化学修饰法难度大，成本高，专一性差，而且要对酶分子逐个进行修饰，操作复杂，难以工业化生产。 现在常用的氨基酸置换修饰的方法是定点突变技术。定点突变（site directed mutagenesis）是20世纪80年代发展起来的一种基因操作技术。是指在DNA序列中的某一特定位点上进行碱基的改变从而获得突变基因的操作技术。是蛋白质工程（Protein Engineering）和酶分子组成单位置换修饰中常用的技术。定点突变技术，为氨基酸或核苷酸的置换修饰提供了先进、可靠、行之有效的手段。 酶分子的定点突变 1、基因序列分析 2、蛋白质结构分析 3、酶活性中心分析 4、引物设计进行基因定点突变 5、酶基因克隆表达 6、变异特性分析 (6) 酶分子的物理修饰 通过各种物理方法使酶分子的空间构象发生某些改变，从而改变酶的催化特性的方法 通过物理修饰，可以了解不同物理条件下，特别是在极端条件下（高温、高压、高盐、极端pH值等）由于酶分子空间构象的改变而引起酶的特性和功能的变化情况。 特点在于不改变酶的组成单位及其基团，酶分子中的共价键不发生改变，只是在物理因素的作用下，副键发生某些变化和重排。 酶修饰后的性质变化 热稳定性：一般来说，热稳定性有较大的提高。 抗原性：比较公认的是PE