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诱变育种步骤 出发菌株的选择 处理菌悬液的制备 诱变处理 中间培养 分离和筛选 筛选营养缺陷型的步骤 诱变 淘汰野生型 检出缺陷型 确定生长谱 检出缺陷型 原理：在固体基本培养基和完全培养基上，生长情况完全不同，缺陷型在CM上生长良好，而在MM上则不生长，野生型都能生长。 具体方法：影印法、点种法、夹层法 生长谱测定的方法 　　　将缺陷型菌株培养后，收集菌体，制备成细胞悬液，与MM培养基(融化并凉至50℃)混合并倾注平皿。待凝固后，分别在平皿的5-6个区间放上不同的营养组合的混合物或吸饱此组合营养物的滤纸圆片。培养后会在某组合区长出，就可测得所需营养。一个平皿测一个菌。 　　　以不同组合的营养混合物与融化凉至50℃的MM培养基混合铺成平皿，然后在这些平皿上划线接种各个缺陷型菌株于各相应位置，培养后根据在这些组合长出可推知其营养因子。在5－6个平皿上可测20株菌以上。 人工控制黄色短杆菌的代谢过程生产赖氨酸 目的微生物富集方法的研究进展 分子生物学的实验手段，在微生物鉴别及特定目标产物 的筛选方面发挥了着越来越重要的作用。如:16SRNA同 源性分析，基因序列分析及DNA/DNA杂交技术等 目前土壤中能够培养的微生物不到总数的1%。微生物的 多样性及资源的开发仍然是今后若干年的研究重点。 2002,陈文新（科学院院士） In contrast to this traditional approach, modern molecular biology techniques allow for DNA library expression screening, which also enables access to enzymes of `nonculturable organisms. By this strategy, for instance, the company Diversa (San Diego, CA, USA) identised 120 unique esterases/lipases from only 16% of the total DNA obtained from an alkaline soil sample. FEMS Microbiology Reviews 26 (2002) 73～81 菌种选育 目的 提高生产能力 提高产品质量 开发新产品 解决生产实际问题 防止菌种退化 方法 基因突变： 自然选育、诱变育种 基因重组： 杂交、原生质体融合、基因工程 一 、 自然选育 ? 在生产过程中，不经过人工处理，利用菌种的自然突变而进行菌种筛选的过程叫做自然选育。 所谓自然突变就是指某些微生物在没有人工参与下所发生的那些突变。一般认为引起自然突变有两个原因：即多因素低剂量的诱变效应和互变异构效应。所谓多因素低剂量的诱变效应，是指自然突变实质上是由一些原因不详的低剂量诱变因素引起的长期综合效应。所谓互变异构效应是指四种碱基的第六位上的酮基和氨基，胸腺嘧啶（T）和鸟嘌呤（G）可以酮式或烯醇式出现，胞嘧啶（C）和腺嘌呤（A）可以氨基式或亚氨基式出现。平衡一般倾向于酮式和氨基式。碱基对发生自然突变的机率约为10－8一10－9。 第二节 自然选育和诱变育种 自然突变有两种情况： 一种是我们生产上所不希望看到的，表现为菌株的衰退和生产质量的下降，这种突变成为负突变。 另一种是我们生产上希望看到的，对生产有利，这种突变成为正突变。 一、自然选育 自然选育在工业生产上的意义 自然选育虽然突变率很低，但却是工厂保证稳产高产的重要措施。 回复突变：高产菌株在传代的过程中，由于自然突变导致高产性状的丢失，生产性能下降，这种情况我们称为回复突变 问题： 高产菌株是正突变高，还是负突变高？ 进一步选育或保藏 移种 生产菌种斜面 制备单孢子悬浮液 分离出单菌落 斜面种子(初筛) 高产菌株 沙土管菌株 斜面种子 摇瓶复筛 高产纯化株 生产试验 自然选育流程图 为何进行复筛？ 筛选：将分离培养后的各型单菌落接斜面培养，成熟后接入摇瓶，测定其发酵生产能力的过程。 初筛：以迅速筛出大量的达到初步要求的分离菌落为目的，以量为主。 复筛：则是精选，以质为主，也就是以精确度为主。 二、诱变育种 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变进行的筛选，称为诱变育种 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质称为诱变剂 诱变剂 物理：紫外，快中子 化学：硫酸二乙酯，亚硝基胍 { 出发菌株的选择 1.选择纯种 2. 平均发酵单位要高，且发酵单位的波动幅度不同，摇瓶间所测得结果的最高值和最低值之差要小。 3.有良好的代谢特性 4.选择对诱变剂敏感的