经典液相色谱精要.pptVIP

第18章 经典液相色谱法 第一节 经典柱色谱 第二节 薄层色谱法TLC 第三节 薄层扫描法 第四节 纸色谱法 第一节 经典液相柱色谱 液固吸附柱色谱、液液分配柱色谱、离子交换柱色谱等。 一. 液–固吸附柱色谱: 固体吸附剂: 一些多孔性物质,表面布满吸附点位(吸附中心)。 吸附: 溶质在液—固、气—固 两相交界面上集中浓缩的现象。 它发生在固体表面上。 (一) 色谱分离过程: X : 样品中各组分分子 Y : 流动相分子 Xm: 流动相中溶质 Ya: 吸附剂表面的流动相分子 Xa: 吸附剂吸附的溶质分子 Ym: 流动相由Ya回到流动相中 吸附平衡常数: 由于流动相分子是大量的,所以[Ym]/ [Ya ]可视为常数。 ∴ Ka = [Xa] / [Xm] — 吸附常数 组分Ka越大, tR越长。(组分易被吸附,移行速度慢,保留值就大)。 洗脱曲线: (二)吸附等温线(不要求） 一定温度,某组分在吸附剂表面吸附平衡,该组分在两 相中的浓度相关曲线。 1、直线形等温线是理想等温线,其所对应的色谱峰为对称 峰。即吸附剂表面没被溶质所饱和，斜率K=Cs/Cm，组 分流出速度不受浓度的影响。峰前不变形，后不拖尾。 2、凸形：由于固体吸附剂表面活性不同，大多数液相色谱 非线形，且凸形较多。吸附剂表面具有吸附能力不同的 吸附点位，溶质在其表面的分配系数不同。溶质分子先 占据强吸附点位，然后再占据次强的、弱的、最弱的。 强的吸附点位被饱和，在洗脱过程中，被强吸附的溶质 洗脱较慢，所以其洗脱峰呈拖尾峰。（减少进样量） 3、凹形：由于进样量较大，影响了固定相的物理性质。随 溶质量的增加, 吸附越强，Cs/Cm增加，所以呈凹形;开始难洗脱,洗到一定程度吸附变弱,快速被洗下来。伸舌峰或前沿（延）峰。 。（减少进样量） 结论：为防止流出曲线变形（伸舌或拖尾），应控制溶质进样量。 (三). 吸附剂的选择和吸附活度： 1. 对吸附剂的要求： (1)表面积大，具有一定的吸附能力。 (2)不应与流动相发生化学反应。 (3)粒度要细，一般要200目。 2. 吸附剂：常用的有：氧化铝、聚酰胺、硅胶等。 酸性pH = 5～4 分离酸性与中性物质. 如氨基酸 (1) 中性pH = 7.5 氧化铝 分离酸性碱性中性物质…….P459 碱性pH =9～10 分离碱性与中性物质. 如生物碱 酸碱性氧化铝能分离的中性氧化铝都能分离,在酸碱中不稳定的的苷类等中性氧化铝也能分离,所以中性氧化铝应用广泛. (2) 硅胶: 吸附能力稍弱于氧化铝,用于分离弱酸或中性物(如 有机酸、氨基酸、甾体等)。硅醇基是使硅胶有一 定吸附能力的活性基团。 颗粒目数的定义：所谓目数，是指物料的粒度或粗细度，一般定义是指在1英寸*1英寸的面积内有多少个网孔数，即筛网的网孔数，物料能通过该网孔即定义为多少目数：如200目，就是该物料能通过1英寸*1英寸内有200个网孔的筛网。以此类推，目数越大，说明物料粒度越细，目数越小，说明物料粒度越大。筛孔尺寸与标准目数对应：筛孔尺寸：4.75mm 标准目数： 4目筛孔尺寸：4.00mm 标准目数： 5目筛孔尺寸：3.35mm 标准目数： 6目筛孔尺寸：2.80mm 标准目数： 7目筛孔尺寸：2.36mm 标准目数： 8目筛孔尺寸：2.00mm 标准目数：10目筛孔尺寸：1.70mm 标准目数：12目筛孔尺寸：1.40mm 标准目数：14目筛孔尺寸：1.18mm 标准目数：16目筛孔尺寸：1.00mm 标准目数：18目筛孔尺寸：0.850mm标准目数：20目筛孔尺寸：0.710mm标准目数：25目筛孔尺寸：0.600mm标准目数：30目筛孔尺寸：0.500mm标准目数：35目筛孔尺寸：0.425mm标准目数：40目筛孔尺寸：0.355mm标准目数：45目筛孔尺寸：0.300mm标准目数：50目筛孔尺寸：0.250mm标准目数：60目筛孔尺寸：0.212mm标准目数：70目筛孔尺寸：0.1