第三章细胞破碎解析.ppt

?细胞破碎与上游和下游工艺设计的关系 3、超声破碎法（Ultrasonication） 　　利用超声波振荡器发射的15-25kHz的超声波处理细胞悬浮液破碎细胞的方法。 ? 超声波破碎的机理 　　一般认为在超声波作用下液体发生空化作用（cavitation),空穴泡由于受到超声波的迅速冲击而闭合，从而产生极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性旋涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切应力，促使细胞液体发生流动，从而破碎细胞。 空化现象：在强声波作用下，引起气泡形成，胀大和破碎的现象。 空化作用后的锡铂纸 能见到的水中空化现象 图3.21 空化作用于水、锡铂纸的照片 ? 超声波振荡器 　　超声波振荡器有不同的类型，常用的为电声型，它是由发生器和换能器组成，发生器能产生高频电流，换能器的作用是把电磁振荡转换成机械振动。超声波振荡器以可分为槽式和探头直接插入介质两种型式，一般破碎效果后者比前者好。 槽式超声波振荡器 探头式超声波振荡器 图3.22 超声波振荡器设备照片 ? 超声波破碎的适用范围 超声波破碎是很强烈的破碎方法，适用于多数微生物的破碎。 一般杆菌比球菌易破碎，G-细菌比G+细菌易破碎，对酵母菌的效果较差。 但超声波破碎产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质失活。 超声波破碎的有效能量利用率极低 由于对冷却的要求相当苛刻，所以不易放大，仅在实验室小规模细胞破碎中常用。 ? 影响超声波破碎细胞的因素 ☆ 声能：决定超声波振幅、频率 ☆ 粘度：影响能耗，并抑制空穴现象 ☆ 探头的材料和形状：材料决定声学和 　 机械性能；探头直径小，声能范围较 小，效率低，振幅与面积成反比。 ☆ 悬浮液体体积：大体积需要高的声能 4、撞击破碎法（ X-press） 　　将浓缩的细胞悬浮液高速喷雾，在低温-20℃~30℃迅速冷冻形成刚性冰晶体，以氮气作载气，把冷冻细胞用500MPa以上的压力从高压阀小孔中高速挤出送入破碎室，高速载气以300m/s高速使冷冻细胞撞击撞击板，冻结的细胞瞬间变形破碎。 ? 撞击破碎法的原理 图3.23 细胞撞击破碎法示意图 ? 撞击破碎法的特点 ☆ 细胞破碎仅发生在撞击的一瞬间，破碎程度均匀，避免反复和过度破碎。 ☆ 可无级调节载气压力控制细胞破碎程度，避免细胞内部结构被破坏，特别适合于细胞器的回收。 ☆ 实验室和工业规模均可应用，细胞浓度在10~20%，实验室规模的间歇处理能力在50~500 mL/h，工业规模的连续处理在 10,000 mL/h 以上。 二、非机械破碎法 酶解法 化学法 物理法 非机械破碎法 气流干燥 真空干燥 冷冻干燥 喷雾干燥 渗透压冲击 冻结和融化 干　燥　法 1、化学破碎法（Chemical permeation） 　　也称化学渗透法，是应用化学试剂改变细胞壁或细胞膜结构，增大胞内物质的溶出速率；或者完全溶解细胞壁，形成原生质体后，在渗透压作用下使细胞膜破裂而释放胞内物质。 　　其破碎效果取决于化学试剂的类型以及细胞壁膜的结构与组成。 条件变化剧烈，易引起大分子物质失活 改变细胞膜 渗透性 干燥法 破碎率较低，不适合对冷冻敏感目的产物 反复冻结-融化 冻结融化法 破碎率较低，常与其他方法结合使用 渗透压剧烈改变 渗透压法 具一定选择性，浆液易分离，但释放率较低，通用性差 改变细胞膜 的渗透性 化学渗透法 具有高度专一性，条件温和，浆液易分离，溶酶价格高，通用性差 酶分解作用 酶溶法 非 机 械 法 破碎率高，活性保留率高，对冷冻敏感目的产物不适合 固体剪切作用 X-press法 对酵母菌效果较差，破碎过程升温剧烈，不适合大规模操作 液体剪切作用 超声破碎法 可达较高破碎率，可大规模操作，不适合丝状菌和革兰氏阳性菌 液体剪切作用 高压匀浆法 可达较高破碎率，较大规模操作，大分子目的产物易失活，浆液分离困难 固体剪切作用 珠磨法 机 械 法 适 应 性 作 用 机 理 分 类 表3.7 细胞破碎方法按作用力分类 一、机械破碎法 ? 是工业规模细胞破碎的主要手段 ? 主要基于对物料的挤压和剪切作用。 ? 主要有高压匀浆、珠磨、撞击破碎和超声波破碎等 1、高压匀浆法（High-pressure homogenization） ——大规模细胞破碎常用方法 　　细胞悬浮液在高压的作用下从阀座与阀之间的环隙高速喷出，每秒速度高达几百米，高速喷出的浆液又射到静止的撞击环上，被迫改变方向从出口管流出。细胞在这一系列高速运动过程中经历了剪切、碰撞及由高压到常压的变化，从而造成细胞破碎。 ? 原理： 图3.10 高压均质机工作原理示意图 　　细胞悬浮液在高压作用下从阀座与阀之间的环隙以450m/s高速喷出后撞击到碰撞环上，细胞在