季的花药培养lotus精要.pptVIP

一、课题目标 说出被子植物花粉发育的过程及花药培养产生花粉植株的两种途径，说出影响花药培养的因素，学习花药培养的基本技术，尝试用月季或其他植物的花药进行培养。 二、课题重点与难点 课题重点：选取适宜的培养材料和培养基。 课题难点：选取适宜的培养材料和培养基。 花丝 花药：囊状结构， 内有很多花粉 （一）被子植物的花粉发育 雄蕊 花粉是由花粉母细胞（小孢子母细胞）历经 减数分裂、有丝分裂而形成的， 花粉是单倍体的生殖细胞。 花粉的发育要经历： 小孢子四分体时期、单核期、双核期等阶段。 小孢子 母细胞 4个 小孢子 1个小孢子 （单核居中期） 花粉管 细胞核 生殖 细胞核 营养 细胞 生殖 细胞 精子 精子 减数 分裂 有丝 分裂 有丝分裂 特点：细胞质浓厚 （双核期） （小孢子四分体时期） （单核期） 小孢子 母细胞 4个 小孢子 1个小孢子 （单核居中期） 花粉管 细胞核 生殖 细胞核 营养 细胞 生殖 细胞 精子 精子 减数分裂 有丝分裂 有丝分裂 问：如果小孢子母细胞染色体数为2n， 成熟的花粉粒有几个细胞？ 染色体总数数目是多少？ 2n n n n n n n n n 注意： ①二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管细胞核和生殖细胞核。（精子在花粉管中形成） ②三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖细胞进行一次有丝分裂，形成两个精子，这样的花粉在成熟时，含有一个营养核和两个精子。 ③两个精子和一个营养核的基因型相同。 ④1花粉母细胞 4个小孢子 减分 有分 4个花粉管细胞核 4个生殖细胞核 有分 8个精子 （二）产生花粉植株的两种途径 ① ② 移栽 花药中的花粉 胚状体 脱分化 愈伤组织 花药中的花粉 脱分化 分化 丛芽 再分化 丛芽 诱导 生根 胚状体 直接由器官产生 由单个细胞产生 由愈伤组织产生 体细胞胚（胚状体）： 在组织培养过程中，某些体细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似，被称为体细胞胚（胚状体）。 人工种子 　　又称人造种子、合成种子或无性种子，就是将组织培养所产生的体细胞胚、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体，包裹在能提供营养的胶囊（人造胚乳）里，再在外面包上一层具有保护功能和防止机械损伤的外膜（人造种皮），造成一种类似种子的结构，能在一定的条件下萌发生长，形成完整植株。 （三）影响花药培养的因素 1、材料的选择（内因） 花期：初花期 花粉：单核期（细胞核由中央移向细胞一侧） 花蕾：完全未开放 材料的选择： 花期早期时的花药比后期的更容易产生花粉植株。一般，月季的花药培养时间选在五月初到五月中旬，即月季的初花期。 选择合适的花粉发育时期也是提高诱导成功率的重要因素。一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞一侧的时期，花药培养成功率最高。 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。 P39： 为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 保证花粉发育的时期是单核期。 2、培养基的组成 培养基因植物不同而有所变化。 植物激素的种类及其浓度配比常对诱导 细胞分裂，生长和分化起决定作用。 亲本植物的生长条件 材料的低温预处理 接种密度 3、其他条件 实验操作 （一）材料的选取 染色镜检 （二）材料的消毒 酒精、氯化汞、次氯酸钙 （三）接种和培养 结果分析与评价 （一）材料的选取 1、选择花药：镜检是否处于适宜的发育期。 2、方法： 醋酸洋红法：最常用，能将花粉细胞核染 成红色 焙花青-铬矾法：当花粉细胞核不易着色， 能将花粉细胞核染成蓝黑色。 （二）材料的消毒 选取花蕾 初步消毒 （70%酒精） 无菌水清洗 彻底消毒 （氯化汞） 无菌水再冲洗 （三）接种和培养 1、剥离花药 尽量不损伤花药（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织）， 彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。 2、接种花药 3、培养 培养条件：25℃，幼小植株形成后才需要光照 过程： 先脱分化培养，当花药裂开长出愈伤组织后及时转移到分化培养基上。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化。 （