高二生物DNA和蛋白质技术2.pptVIP

2．方法及原理 (1)凝胶色谱法原理 蛋白质比较 相对分子质量大 相对分子质量小 凝胶内部 不能进入 能进入 运动方式 垂直向下 垂直向下和无规则扩散运动 经过路程 较短 较长 洗脱次序 先流出 后流出 提醒　凝胶色谱柱的直径大小不影响分离效果，但直径过大造成洗脱液体积大，样品稀释度大；凝胶色谱柱的高度与分离度有关。 (2)凝胶电泳法原理 凝胶电泳法的原理是不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。如下表： 决定运 动方向 形成 库仑力 形成 阻力 决定运 动速率 电荷性质 √ 电荷量 √ √ 分子形状 √ √ 分子大小 √ √ 3.实验操作流程 粗分离——透析(去除小分子杂质) 　 纯化——凝胶色谱法进行分离和纯化 　 纯度鉴定——SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子量 重要考点提示 1. 红细胞洗涤过程中，洗涤三次后，上清液仍有黄色，可增加洗涤次数，否则无法除去血浆蛋白；离心时转速要低，时间要短，否则白细胞等会一同沉淀，达不到分离效果。 2. 血红蛋白释放过程中，蒸馏水的作用是涨破红细胞，甲苯的作用主要是溶解细胞膜。 3. 为了加快干凝胶的膨胀，可将加入洗脱液的湿凝胶用沸水浴加热，逐渐升温至接近沸腾，通常只需1～2 h。这种方法不但节约时间，而且可以除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的空气。 4.滴加样品时，吸管管口要贴着管壁环绕移动，防止破坏凝胶面。 * * 一、DNA的粗提取与鉴定 1．DNA提取的方法 (1)基本思路：选用一定的________或________方法分离具有不同________或________的生物大分子。 (2)原理：利用DNA与________、________和________等在________和________性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 对应学生用书196页 项目 两支20 mL的试管 1号 2号 实 验 步 骤 加入2 mol/L的NaCl溶液 5 mL 5 mL 加入丝状物(DNA) √ 用玻璃棒搅拌 丝状物溶解 加入二苯胺试剂 4 mL 4 mL 沸水浴加热 5 min 5 min 观察现象 不变蓝 变蓝 二、PCR扩增技术 三、血红蛋白的提取与分离 自主核对： 一、物理　化学　物理　化学　RNA　蛋白质　脂质　物理　化学　NaCl溶液　DNA　杂质　杂质　DNA　蛋白质　DNA　蛋白质　DNA　蛋白酶　60～80℃　80℃　60～80℃　细胞核　DNA　DNA　DNA　蒸馏水　过滤　洗涤剂　食盐　充分搅拌和研磨　NaCl　嫩肉粉　60～75℃　10～15　冷却　酒精　白色丝状物　 三、相对分子质量的大小　相对分子质量较小　凝胶内部的通道　较长　较慢　相对分子质量较大　凝胶外部　较短　较快　多孔　多糖　酸　碱　pH　缓冲溶液　缓冲溶液　pH　电场　蛋白质　电场　带电性质　大小、形状　迁移速度　琼脂糖凝胶　聚丙烯酰胺 1．PCR技术与DNA复制有何区别？ 2．蛋白质提取和分离的理论依据是什么？ 考点1　DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 对应学生用书197页 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质 基本原理 方法 目的 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质 DNA不溶于 酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二 苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA (2)植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。 提醒　人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 3．实验步骤及注意事项 (1)步骤：提取血细胞核物质(蒸馏水涨破)→溶解(2 mol/L的NaCl)→过滤(除杂质)→析出(滴蒸馏水，降NaCl浓度至0.14 mol/L)→过滤→再溶解(2 mol/L的NaCl)→过滤→进一步提纯(体积分数为95%的冷却酒精)→鉴定。 (2)鉴定 (3)注意事项 ①制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血