临本(查)第十四DNA的生物合成精要.ppt

真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 （一）复制的保真性依赖正确的碱基选择 DNA聚合酶靠其大分子结构协调非共价（氢键）与共价（磷酸二酯键）键的有序形成。 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型。与相应的嘧啶形成氢键配对，嘌呤应处于反式构型。 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-pol α（引物酶活性）和pol δ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原 （proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。 二、真核生物复制的延长： 发生DNA聚合酶α/δ转换 DNA-pol δ和pol α分别兼有解螺旋酶和引物酶活性。 在复制叉及引物生成后，DNA-pol δ通过增殖细胞核抗原（PCNA）的协同作用，逐步取代pol α，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成前导链。 后随链引物也由pol α催化合成。然后由PCNA协同，pol δ置换pol α，继续合成DNA子链。 五、真核生物染色体DNA在每个细胞周期中只能复制一次 真核生物染色体DNA 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节，与蛋白激酶活性有关。蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。相关的激酶都有调节亚基即细胞周期蛋白(cyclin)，和催化亚基即细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin dependent kinase，CDK)。 哺乳类动物细胞内还发现天然抑制CDK的蛋白质，例如锚蛋白(ankynin)是CDK4的特异性抑制物，P21蛋白能抑制多种CDK。锚蛋白和P21蛋白的抑制/活化可使细胞周期开放/关闭，因此被形容为细胞周期的检查点(check point)蛋白。 RNA病毒在细胞内复制成双链DNA的前病毒(provirus)。 前病毒保留了RNA病毒全部遗传信息，并可在细胞内独立繁殖。在某些情况下，前病毒基因组通过基因重组(recombination)，参加到细胞基因组内，并随宿主基因一起复制和表达。 这种重组方式称为整合(integration)。前病毒独立繁殖或整合，都可成为致病的原因。 二、逆转录的发现发展了中心法则 逆转录酶和逆转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 逆转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对逆转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 D-环复制时需合成引物。mtDNA为双链，第一个引物以内环为模板延伸。至第二个复制起始点时，又合成另一个反向引物，以外环为模板进行反向的延伸。最后完成两个双链环状DNA的复制。复制中呈字母D形状而得名。 D环复制的特点是复制起始点不在双链DNA同一位点，内、外环复制有时序差别。 思考题： 1．DNA复制的保真性依赖什么机理？ 2．原核生物DNA聚合酶有那几种？它们在DNA复制和损伤修复中起什么作用？ 3．简述参加DNA复制过程的酶及蛋白质因子的作用。 dNTP DNA-pol γ D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。 本章小结 DNA复制的基本规律 DNA复制的酶类 DNA复制过程 反转录 1.半保留复制2.双向复制 3.有特定的起始点 4.半不连续复制 5.复制的保真性（忠实性） DNA聚合酶、解螺旋酶、DNA拓扑异构酶 引物酶、DNA连接酶等 起始、延长、终止 * * * * * * * * * * * * * * * * 通过表格再来总结一下。。。。。。。大家要重点掌握原核生物三种DNA聚合酶的功能上的区别。 先来看一下原核生物的复制过程。原核生物的复制主要分为3个阶段：起始、延长、终止。其中在起始阶段主要是完成了一些复制的准备工作。其中第一项准备工作是。。。。。我们反复强调过了，DNA复制亲代。。。要解离成。。。单链，因此复制起始第一项必