基因工程导论应用和安全性管理精要.pptVIP

基因工程genetic engineering 参考教材 基因工程 楼士林等 科学出版社 2010 基因工程原理、方法与应用（工程硕士教材） 许煜泉等 清华大学出版社 2008 基因工程原理 徐晋麟等 科学出版社 2007 基因工程原理(上\下) 第二版 吴乃虎 科学出版社 1998 基因克隆的分子基础与工程原理 刘志国等 化学工业出版社 2003 植物基因工程 王关林 方宏筠 科学出版社 2002 绪论 学科诞生的理论和技术基础 基因工程的概念和研究内容 基因工程的应用和发展 基因工程的研究动态 基因工程技术诞生的三大理论基础 ▼ 20世纪40年代，O.T.Avery发现生物遗传信息的化学本质是DNA而非protein(肺炎球菌转化实验) ▼ 20世纪50年代，Watson-Crick提出DNA的双螺旋结构模型；半保留复制机理；解决了基因的自我复制和传递问题 ▼ 20世纪60年代，相继提出“中心法则”和操纵子学说, 成功破译遗传密码43，阐明遗传信息的流向和表达问题 20世纪40-60年代的3大理论发现，从理论上确立了基因工程的可能性，但在进行基因工程技术操作时，科学家仍面临3个基本技术问题： ① 如何从生物体庞大的双链DNA分子中将所需要的 基因片段切割下来； ② 如何将所切割下来的DNA片段进行繁殖扩增； ③ 如何将所获得的基因片段重新进行连接。 基因工程技术诞生的技术基础 ▼“基因剪刀”－限制性内切酶 1970年 H.O.Smith和K.W.Khorana在流感嗜血杆菌(Haemophilus inffuenzae)中分离纯化了第1个核酸限制性内切酶HindⅡ 1972年 H.W.Boyer实验室首先发现EcoRI 核酸内切酶 ▼ 逆转录酶 1970年 Baltimove和Temin等同时各自发现了 逆转录酶，完善了遗传学（生物学）中心法则，使 真核基因的制备成为可能 ▼ 连接酶 1967年 世界上5个实验室几乎同时发现DNA连接酶： 该酶参与DNA单链裂口(gap)或缺口(nick)的修复， 连接DNA分子的自由末端 1970年 Wisconsin大学 H.G.Khorana实验室发现 T4 DNA连接酶 活性更高，能催化完全分离的两段DNA分子进行平末端的连接 ▼ 载体 早期载体工作的研究对象：噬菌体； 侧重于研究病毒和寄主细菌间的关系 20世纪40年代 Avery发现外源DNA分子导入细菌细胞的转化现象(肺炎链球菌实验，发现DNA是遗传信息的携带者而非蛋白质) 20世纪70年代的上述发现，从技术层面上解决了基因工程技术的实际问题，最终促成了基因工程技术的诞生 重大历史事件 ?第一个重组体的构建 1972年，美国斯坦福大学P.Berg等在PNAS上发表了题为∶“Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40: circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of Escherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，标志着基因工程技术的诞生 P.Berg的具体研究内容： 1972年，美国斯坦福大学 P.Berg博士研究小组 用E.coRⅠ对猿猴病毒SV40 DNA和λphageDNA 酶切消化后， 再用T4 DNA连接酶将两种消化片段连接成重组的杂种DNA分子 意义：世界上第一次成功的DNA体外重组实验  ?第一个有功能的重组体的构建 ◆虽然Berg的工作具有划时代的意义，但是他们并没有证明体外重组的DNA分子具有生物学功能 Cohen的研究内容： 1973年, 斯坦福大学 S.N.Cohen 研究小组 将编码卡那霉素（kanamycin）抗性基因的E.coli R6-5质粒DNA 和编码四环素（tetracycline）抗性基因的另外一个E.coli pSC101质粒DNA 在体外切割并连接成重组体分子，然后将混合物转化E.coli，在含四环素和卡那霉素的平板上筛选出了具双抗抗性的菌落,实现了细菌遗传性状的转移 基因和基因工程的概念 基因工程实施4个必要条件： 工具酶 载体 基因 受体细胞 载体 目的基因 基因工程研究的主要内容 基础研究：针对基因工程技术的操作