鸡蛋清溶菌酶对头孢他啶诱导的福氏志贺氏菌内毒素释放的抑制作用精品精要.doc

中国中医研究院中药所 硕士学位论文 鸡蛋清溶菌酶对头孢他啶诱导的福氏志贺氏菌内毒素释放的抑 制作用 姓名:王丹 申请学位级别:硕士 专业:中药学 指导教师:梁爱华;周钟鸣文摘要 级中国中医研究院中药所硕士学位论文 中文摘要 菌血症和内毒素血症是革兰氏阴性败血症病人的两大致死状态。强力、 高效的抗生素虽能有效地控制菌血症,但是病人的死亡率仍然很高,其原因 可能与抗生素在杀死细菌的同时诱导细菌释放内毒素,引起或加重内毒 素血症有关。因此,在应用抗菌素治疗的同时,应用其它具有中和内毒素的 药物,将会改善病人的预后。 通过激活巨噬细胞及血管内皮细胞而产生一系列的细胞因子,如肿 瘤坏死因子、白细胞介素一一等,从而引起或加重内毒素休克乃至 死亡。另外,当激活巨噬细胞时,被活化的巨噬细胞产生分泌一氧化氮 ,并可形成一,从而引起组织细胞损害。 头孢他啶是临床上常用的一种一内酰胺类抗菌素。有研究发现, 与革兰氏阴性细菌共同培养时,可引起大量的释放到培养上清液中, 该上清液可刺激巨噬细胞释放大量的炎性因子,造成严重的炎症反应。 是具有多价阴离子特性的大分子物质,有些阳离子多肽能与之结合,并降低 其毒性”。”。鸡蛋清原名鸡子白,首载于《神农本草经集注》。鸡蛋清具有润 肺利咽,清热解毒的功能。鸡蛋清中含有一种多肤成分一溶菌酶 ,¨,近年研究发现,是一种富含阳离子的蛋白质, 这种蛋白质与一内酰胺类抗生素联合应用于大肠埃希氏菌培养时,? 对诱导的大肠埃希氏菌释放有抑制作用,从而降低其培养上清液对巨 噬细胞昀激活,减少炎性因子的释放,减轻炎症反应。表明?可能有 中和的作用。 福氏志贺氏菌是肠杆菌中一种最常见的病原菌,有强烈的内毒素,引起 人类的细菌性痢疾。在婴幼儿可引起急性中毒性痢疾,死亡率较高。临床上, 细菌性痢疾,尤其是中毒性痢疾可能会因为细菌释放内毒素入血而引起较严 重的毒血症。如果用?与抗菌素联合使用,即能控制菌血症,又能抑制 内毒素释放,则可能会改善病人预后,这将在治疗上具有较大的意义。为此中文摘要 级中周中医研究院中药所硕士学位论文 本课题将通过体外及动物体内实验研究?对诱导的福氏志贺氏菌内 毒素及其致炎活性物质释放的影响;并通过细菌形态学及分子生物学实 验探讨?抑制诱导的释放及致炎症反应的机理。通过抗原性实 验探讨?在动物体内的给药途径。为?的研究开发提供理论依据。 .体外研究 采用系列稀释法测定对福氏志贺氏菌的最低抑菌浓度。采用 肉汤和稀释的兔血液培养系统,取 细菌母液加入到含或不合? 的营养肉汤和稀释的兔血液中,于℃水浴中震荡培养一段时间,在细菌指 数生长期向各试管中加入,继续培养一定时闽,终止培养。将细菌悬液 做系列稀释,采用营养琼脂平板接种,计数各培养管中存活的细菌数,探讨 单独或与联合应用对细菌活性的影响。将上述细菌悬液离心收集 上清液,储存于一℃备用。将细菌上清液作适当稀释后,用偶氮显色法测定 释放到上清液中的浓度,探讨联合用药时¨对诱导的释放 的影响。将细菌培养上清液加入到培养好的巨噬细胞中。用法和染料 摄入法测定其对巨噬细胞炎性因子龋的诱生能力。用试剂测定其 对巨噬细胞炎性因子的诱生能力。探讨耻与联合用药组的细菌 培养上清液对巨噬细胞中炎性因子的诱生能力。 结果表明:对福氏志贺氏菌的为./。营养肉汤培养系统 中 、】/单独应用可迅速杀死细菌;?单独应用对细菌生长 无明显影响;而.与联合使用保持了与单独用药相当的杀菌作 用,菌落计数结果与单独用药组相近。在稀释的兔血液培养液中,、 /单独用药组对福氏志贺氏菌有较强的杀菌作用.,但较在肉 汤中弱,联合用药较单独用药有更强的杀菌作用.。在营养肉汤 和稀释的兔血液培养液中,、、/单独处理组均可造成细菌 迅速溶解,导致大量的释放到培养上渍液中,与无处理对照组比较 .,其细菌上清液在体外培养的巨噬细胞上可诱导大量的炎性因子如肿 瘤坏死因子 【、一氧化氮产生,与无处理对照组比较.:而 与联合用药后可阻止细菌溶解,显著降低的释放.,中文摘要 级中国中医研究院中药所硕士学位论文 【、等炎性因子的产 降低其细菌培养上清液对巨噬细胞的激活,减少 生,与单独处理组比较.。结果提示:联合用药时对 的杀菌能力无明显影响,在有血液成分存在时,联合用药较单独使用有 更强的杀菌能力。联合用药时?能抑制由诱导的细菌溶解,降低细 菌释放到培养上清液中,从而减少其上清液对巨噬细胞的激活,减少炎 性因子的产生。 .动物体内研究 . 与联合应用对腹膜炎败血症小鼠及家兔体内的释放 的影响 给小鼠、家兔腹腔注射福氏志贺氏菌肉汤培养悬液造成腹膜炎败血症模 型,后,分别给各组小鼠、家兔腹腔注射或?/。小鼠于给 药后、小时经心脏取血,家兔于给药后、和小时经心脏取