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毛细管电泳在手性分离中的应用 手性化合物——两个对映异构体 ? 研究发现，手性化合物的两个对映体在药效、生物活性等方面具有很大的差别。 溴氰菊酯——高效旋光异构体敌杀死 (Decis) 英国科学家Elliott 药效提高了8倍 1974 法国罗素优克福公司 与此同时，医药界也出现了轰动一时的无手胎儿的悲剧。 反应停（酞酰亚胺哌啶） S-体：制畸性 R-体：抑制妊娠反应作用 R+S体（外消旋体）：无手胎儿 FDA要求分离测定药物对映体 分离手性化合物对映体，并测定其对映体过量值，引起了人们的普遍重视和关注。 将对映体分开，并进行定性、定量分析。 可以根据自己所有的仪器和实验条件选择所用的方法。 手性化合物对映体分离 气相色谱法 液相色谱法 毛细管电泳法 手性固定相 手性固定相以及在流动相中添加手性选择剂 在缓冲液中添加手性选择剂 凝胶层析法 不是根据试样组分与固定相之间的相互作用，而是依据试样分子尺寸大小不同而进行分离的。 在色谱柱中添加一定的凝胶（可以是不同大小的葡聚糖和聚苯乙烯凝胶），利用不同大小的分子在凝胶中的运动路线不同而在不同的时间流出色谱柱而将它们分离。 凝胶色谱法又叫分子排阻色谱，按流动相的类型可分为凝胶渗透色谱（以有机溶剂为流动相）和凝胶滤过色谱（以水为流动相）。 凝胶是凝胶色谱的固定相，是产生分离作用的基础。 凝胶是一种表面惰性，含有大量液体（水），柔软而富有弹性，具有立体网状结构的多聚体。试样组分进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及凝胶网孔旁流过。 对于那些太大的组分分子由于不能进入网孔而被排斥，随流动相的移动而最先流出； 小的组分分子则能渗入到大大小小的网孔中而完全不受排斥，所以最后流出； 中等大小的组分分子可渗入到较大的网孔中，但受到较小的网孔的排斥，所以介于二者之间流出。 凝胶色谱主要用来分离高分子类物质（相对分子量大于2000），测定聚合物的相对分子量分布，分离相对分子量相差较大的混和物，还可以对未知样品进行初步的探索性分离。 亲和层析法 分离的原理是： 基于在色谱载体上键连一种配基，此配基与要分离纯化的物质具有特定的作用力，当进行层析时，混合物样品中只有特定结构的物质可以与带有配基的载体相连，其余物质不作用，随流动相流出色谱柱，剩余的是载体上连有所要纯化的物质。再使用洗脱剂将所需物质洗脱，就可以得到较纯的物质。 注意：色谱柱中所装的载体及其键连的配基是一定量的，因而其所能键连纯化的 物质的量也是一定的，如果超过这个量，将有一部分物质得不到纯化。 因此，在操作过程中，需要根据所用载体的量决定，在色谱柱上添加多少样品。 固相萃取（solid phase extraction SPE） 原理：利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。 固相萃取采用高效、高选择性的吸附剂（固定相），能显著减少溶剂的用量，简化样品预处理过程，同时所需费用也有所减少。 * 现代实用生化分离技术 一、分离的意义 生物学研究中的氨基酸、多肽、蛋白质分析；核苷酸和核酸分析； 常用药物中有效体和无效体的分离分析； 多环芳烃等环境污染物的分离分析； 化工产品质量的分析；农药残留的分析；食品添加剂和饲料添加剂的分析等 样品 组成 含量 分离、分析鉴定、定量 各种分析工作，均离不开前期的分离工作。 基因的测序、功能 蛋白质的结构、功能，及其与其他物质的作用。 食品中的有效成分分析，如茶中的儿茶素、茶多酚等各种黄酮类物质的含量、功能及其影响因素 昆虫的粪便、挥发性物质、以及气味感受蛋白等。 常用的分析技术：x-射线晶体衍射、荧光光谱、紫外吸收光谱、生物质谱、核磁共振谱、红外光谱等 均需纯品才能得到有说服力的数据，因此测定前，必须分离纯化。 二、分离技术 其中，各种色谱分析法以其高超的分离能力，分离效率远高于蒸馏、萃取、离心等优点，目前已成为生物化学研究领域最常用、最实用的分离手段。 色谱和其它技术的联用，尤其是高效液相色谱－质谱（HPLC-MS），毛细管电泳－质谱(CE-MS)联用技术，对生物大分子的分离和鉴定也发挥了极大的作用。 常规分离技术 蒸馏 萃取 离心 薄层色谱和柱色谱 减压蒸馏、水蒸汽蒸馏、旋转蒸发、冷冻干燥 固相萃取、固相微萃取、索氏提取 超速离心、高速离心 毛细管气相色谱、高效液相色谱、毛细管电泳、逆流色谱、凝胶色谱、亲和色谱 先进的样品处理技术及现代仪器分离手段 实用分离技术课 介绍现代仪器分离技术：各种色谱技术及其应用，特点，方法优化的步骤、优缺点及其适用范