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Construction of Chitin/PVA Composite Hydrogels with Jellyfish Gel- Like Structure and Their Biocompatibility 构建几丁质/聚乙烯醇复合水凝胶的水母凝胶状结构及其生物相容性 翟翠红 2014.9.19 目录 研究目的 实验部分 结果和讨论 结论 研究目的 水凝胶（Hydrogel）是三维的网络结构，是亲水性聚合物，性质柔软，能保持一定的形状，能吸收大量的水。 天然高分子水凝胶 大多数生物聚合物为基础的凝胶强度相对较弱， 这在很大程度上限制了其作为生物材料的应用。 研究目的 几丁质 α-几丁质，β-几丁质， 和γ-几丁质 安全，可持续，生物相容，生物可降解 几丁质很少利用研究，是因为其溶解性差 几丁质凝胶能促进细胞粘附和增殖，表现出好的生物相容性，无毒性。 但是，几丁质凝胶在低浓度仍然脆弱，所以改善他们的机械性能对其成功应用至关重要。 研究目的 PVA 聚乙烯醇（PVA）是一种无毒的，水溶性的， 生物相容的，和生物可降解的合成聚合物。 RCP 几丁质/聚乙烯醇复合水凝胶 实验过程 材料：纯化的几丁质粉末编码为PCP PVA 环氧氯丙烷（ECH） 氢氧化钠和尿素 （溶剂） L929细胞（成纤维细胞） MDKC细胞 实验过程 几丁质/PVA水凝胶的制备（冷冻/解冻过程） 几丁质溶液的制备 PVA水溶液和ECH（1克，20毫升溶液）逐滴加入到用不同量的几丁质溶液。 得到的几丁质/聚乙烯醇溶液保持在25℃12小时，以形成部分化学交联凝胶。接着，将凝胶冷冻于-20℃下放置24小时，并在室温下解冻，五个循环，充分形成PVA的结晶和部分物理交联 。把凝胶小心取出并用蒸馏水洗涤，以完全除去碱，尿素和过量的ECH。 几丁质 和PVA的总浓度为约6％，并且将所得的几丁质/聚乙烯醇复合水凝胶（RCP）按几丁质的体重百分比分别编码为RCP100，RCP83，RCP79，RCP75， RCP70，RCP50，RCP25和RCP0 （从100到0）。 实验过程 表征 FESEM(场发射扫描电子显微镜 ) FTIR （傅里叶变换红外光谱） WAXD(广角X射线衍射) 13 C NMR（固态核磁共振碳谱） DSC(差示扫描量热法） 实验过程 细胞活力检测 MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 实验过程 L929细胞和MDKC细胞培养 处理后的RCP75凝胶与L929细胞共培养 对于MDKC细胞培养中，RCP75切片放入24 孔板灭菌。随后，MDKC细胞接种到24孔板（2×105细胞/孔）温育48小时。在24 孔板无RCP75凝胶对细胞培养作为对照。 结果和讨论（RCP凝胶的交联作用） Figure 1. Solid-state 13C NMR of the samples: PCP powder (a), RCP100 (b), RCP0 (c), RCP75 (d), RCP50 (e), and RCP25 (f). 碳原子的化学位移确认该PCP是α-几丁质。 观察到的化学位移几丁质峰（C1-C5）RCP75，RCP50，和RCP25 凝胶转移到一个更高的磁场，表明几丁质和PVA之间形成了很强的氢键，增加了围绕这些碳原子的电子密度。 然而，与RCP100的C6高峰相比，RCP75，RCP50，和RCP25凝胶移动到一个较低的磁场,表示化学交联的发生,从而降低了碳的电子密度。 结果和讨论 Figure 2. FTIR (a) and WAXD spectra (b) of the PCP powder, as well as RCP100, RCP75, RCP50, RCP25, and RCP0 gels. （a）中酰胺 I，II，和III键，I 酰胺的PCP粉末分成两个小峰，是因为存在两种类型的氢键，说明PCP中存在α-几丁质