淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测精要.ppt

专题27　酶的应用-2 高考真题聚焦 核心考点整合 易错易混归纳 实验目的： 1. 制备固定化α-淀粉酶 2.进行淀粉水解的测定 广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛。 枯草芽孢杆菌 实验内容：1.制备固定化酶；2.淀粉水解的检测 重点问题 实验设备及用品、材料 （课本） 实验步骤： 1.直接使用酶和使用固定化酶有何不同？ 2.固定化酶的方法？ 3.淀粉水解的过程及检测 4.如何区分固相和液相酶的作用？ 尿糖试纸对葡萄糖酶与过氧化氢酶进行了固定 1、稳定性差 2、回收困难，一次使用 3、产物的分离纯化困难 一、为什么要对酶进行固定化？ 固定化酶的优点 固定化酶的缺点 酶既能与反应物接触，又能与产物分离 固定在载体上的酶还可以被反复利用 一种酶只能催化一种化学反应 只能应用于可溶性底物 二、什么是固定化酶 固定化酶（Immobilized enzyme） ：固定在一定载体上，在一定空间范围内起催化作用的酶。 水溶性酶 水不溶性载体 水不溶性酶 （固定化酶） 固定化技术 （一） 吸附法 （二） 结合法 （三） 交联法 （四） 包埋法 三、固定化酶的方法 * 固定化酶的模式图 定义；利用各种固体吸附剂将酶或含酶细胞吸附在其表面上而使酶固定的方法称为物理吸附法，简称吸附法。 常用的吸附剂：活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石等。 优点：操作简便、条件温和、不易变性失活、载体廉价、可反复使用。 缺点：酶与载体结合不牢固，易脱落。 （一）吸附法 定义：将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法。 根据包埋的材料和包埋方法的不同，可分为：凝胶包埋法和半透膜包埋法两类。 （二）包埋法 1、离子键结合法 通过离子键使酶与载体结合的固定化方法。 载体：DEAE-纤维素、TEAE-纤维素、 DEAE-葡聚糖凝胶、CM-纤维素。 优点 缺点 酶与载体结合不牢固，使用时需严格控制好pH值、离子强度、温度等操作条件。 （三）结合法 条件温和、操作简便、活力损失少。 ★通过共价键使酶与载体结合的固定化方法。 载体主要有：纤维素、琼脂糖凝胶、葡聚糖凝胶、甲壳质、氨基酸共聚物、甲基丙烯醇共聚物等。 ※载体→活化→活化载体基团＋酶分子基团 2、共价键结合法 利用双功能试剂，在酶分子间或酶与载体间，或酶与惰性蛋白间进行交联反应，以制备固定化酶的方法。 交联试剂：戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、双偶氮苯等。 （四）交联法