不溶性药物脂质体的制备.docVIP

目 录 中文摘要 1 Abstract 2 一 前言 3 （一）羟基磷灰石的研究背景 3 1．结构与性质 3 2．学术背景 3 3．制备方法 4 4．应用领域 6 （二）HAP脂质体 7 1．脂质体的来源和特点 7 2．HAP脂质体 7 (三)课题的研究内容 8 二 材料与方法 9 （一）材料 9 1．仪器 9 2．试剂 9 （二）试验方法 10 1． 羟基磷灰石（HAP）晶体的制备 10 2. 磷酸缓冲液（PBS）的制备 10 3. 钙指示剂的配制 10 4．空白脂质体的制备 11 5. HAP晶体与空白脂质体混合液的制备 11 6. 表征方法 11 三 结果与讨论 13 1. 包结温度对脂质体的影响 13 2. HAP的量对脂质体的影响 13 3. 吐温-80 的量对脂质体的影响 13 4. 乳化时间对脂质体的影响 14 6. 正交设计确定HAP脂质体的配方 14 四 结论 18 致 谢 19 参考文献 20 不溶性药物脂质体的制备 一 前言 （一）羟基磷灰石的研究背景 1．结构与性质 羟基磷灰石（Hydroxylapatite，简称为HA或HAP）,分子式为Ca10(PO4)6(OH)2，Ca/P为1.67，分子量1004，理论密度较大，为3.156g/cm3，折射率为1.64～l.65pH=7-9），是六方晶系结构的白色粉末或多孔颗粒，低pH时易被破坏，宜在中性或偏碱性时应用，不溶于水、乙醇、氯仿等 [1]，是构成人体骨骼、牙齿的无机质，具有良好的生物活性、生物相容性、骨传导性及与自然骨矿物组分的相似性[2]，在体液的作用下，可发生部分降解，被人体组织吸收并利用，产生骨传导作用[3]。此外，羟基磷灰石被用于牙膏添加剂以防止牙龈炎，作为植皮装置应用于临床[4]。 图1 羟基磷灰石的结构式 2．学术背景 羟基磷灰石的研究可以追溯到1790年，Wemer用希腊文字记载并命名为磷灰(Apatite)。在1926年，Bassett通过X—射线衍射的方法证实人骨和牙齿中的无机矿物成分与磷灰石的成分相似。从20世纪50年代以来，人们广泛关注于HAP的合成。不仅表现在合成高纯度的HAP单晶[5,6]方面，而且还合成出与人骨极为接近的CHAP[7,8]和较高稳定性的FHAP[9,10]，并且利用陶瓷致密的烧结工艺，烧制出HAP多晶体，并在临床医药方面得到广泛应用[11]。在1974年到1975年间，Aoki等[12]通过实验研究发现，羟基磷灰石的生物相容性与其洁净与否没有一点关系。从此，HAP因其具有良好的生物相容性和生物活性，被广泛应用于人体骨组织的修复和替代技术[13-15]，羟基磷灰石的全方位的基础与临床研究也就在世界各国随即展开[16]。 纳米技术是20世纪90年代开始迅速发展的研究领域，其粒子具有小尺寸效应、量子尺寸效应、宏观量子隧道效应、表面效应等[17]独特的性能。在国际性生物技术领域中占据着最前沿的地位，而用于诊断、修复生物体病损组织的纳米生物材料已经是纳米生物技术的核心。 3．制备方法 制备纳米HAP的方法主要有水热反应法、酸碱反应法、微乳液法等[18]。本文采用的是溶胶-凝胶法。 水热反应法 水热反应法的特点是在一个特制的密闭容器内，在高压的环境中，以水溶液为反应介质，使介质的温度上升到200-400℃，从而使OH— 加入晶格，即可获得结晶较好的高纯度HAP多晶体粉末。 酸碱反应法 酸碱反应法是依据酸碱的中和反应制得HAP。首先，将一定量的Ca(OH)2的粉体用水调成糊状，加入到盛有70℃蒸馏水的烧杯中并搅拌，缓慢滴加H3PO4便于调节pH值，即生成了HAP。 微乳液法 微乳法是将CaCl2与(NH4)2HPO4制成微乳液，以环己醇为油相，以正己烷为表面活性剂，混合两种微乳液并静置一定时间，用无水乙醇洗涤其沉淀物，即可获得20-40nm的HAP粉体。 图2 微乳液法制备HAP的流程图 溶胶-凝胶法 溶胶-凝胶法是利用Ca2+溶胶缓慢滴入(PO4)3-溶胶中，用氨水调节pH值在8-10之间，生成的HAP凝胶经24h老化、洗涤、干燥制得。 4．应用领域 羟基磷灰石作为一种活性生物材料，因其与人体组织相容性好，在临床上被广泛应用于如种植牙、制作人工骨及人工关节、骨填充材料[19]等人体硬组织的修复和置换，也可以作为如鞍鼻充填之类的整形植入物，但其缺点是在人体生理环境中质地脆弱且抗疲劳性差，并且在肿瘤治疗过程中也起到举足轻重的作用[20]。 治疗牙齿疾病 有报道称，羟基磷灰石的糊剂可用于治疗因外伤、龋齿引起的牙根停止发育和牙早失等牙齿疾病，并且产生相当不错的效果。HAP并没有成骨性，但可封闭根尖孔，因此HAP的糊剂是一种理想的诱导生物大分子材料，值得临床推广与研究