第六花药和花粉培养精要.ppt

第六章 花药和花粉培养 花药培养（anther culture）：指用无菌操作技术，将发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，诱导花粉单性发育和分化形成植株的过程。 花粉培养（pollen culture）：指将花粉粒从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体，进行离直接离体体培养使花粉粒脱分化，发育成植株的过程。 一、单倍体育种 单倍体：指具有配子染色体数目（n）的个体。 一倍体：体细胞含一个染色体组的个体。 绝大多数生物为二倍体生物，其单倍体的体细胞中含一个染色体组 有的单倍体生物的体细胞中不只含有一个染色体组。如果原物种本身为多倍体，那么它的单倍体的体细胞中含有的染色体组数一定多于一个。如四倍体水稻的单倍含两个染色体组，六倍体小麦的单倍体含三个染色体组。 单倍体育种：指将具有单倍染色体的植株，经人工染色体加倍，使其成为纯合二倍体，从中筛选出优良个体，直接繁育出新品种，或选出单一优良性状的个体，作为杂交育种的原始材料。 二、单倍体植物在生产实践中的价值 筛选到纯合二倍体，后代性状不分离。提高常规育种的选择效率，缩短育种年限，提高育种效率。 单倍体植株中由隐性基因控制的性状，虽经染色体加倍,但由于没有显性基因的掩盖而容易显现 转基因技术中单倍体植株用作受体，可获得稳定的转基因植株 有单倍体获得的纯合二倍体可用于遗传变异规律的研究，基因定位，性状分子标记等 三、单倍体植株的产生方法 花药培养 花粉培养 未受精的子房、胚珠的培养 诱导孤雌生殖法（远源花粉诱导，受过辐射的花粉诱导） 染色体消除法（一些植物种杂交后，核型不稳定，随着发育父本的染色体会被消除掉而只剩下母本的染色体。大麦、小麦等单倍体产生中应用） 四、植物花药/花粉植株培养 历史 Guha和Maheshwari （1964） 曼陀罗花药培养 Nitsch 和 Norreel (1973) 烟草花粉培养（游离小孢子培养） Chu（1973）小麦花粉培养 （早期花药培养主要依靠小孢子的自然胚胎发生产生单倍体，能自发形成胚胎发生的基因频率较低，效率极低） 80年代后期到90年代期间，花培技术迅速发展。许多作物小孢子培养已经成功。十字花科、麦类、水稻、玉米等。 90年代，一些先前被认为是不易进行小孢子培养的基因型也相续成功Konzak (1999) 。 花的结构 1、花药、花粉粒 花丝 ： 将花药托展在空间，以利传 粉，同时把营养输送到花药 雄蕊 部分，供其发育时用 （小孢子叶） 花药壁：由纤维层、中层、绒毡 层构成，二倍体，位于外部 花药： 花粉粒：位于内部，性细胞，单倍体 花药发生的一般程序 2、花粉粒的发育 花粉成熟的各个时期： 四分体期：四个小孢子未分离时期 单核期：游离的小孢子时期 单核早期：从四分体分离出来时细胞壁薄 单核中期：核位于中央且变大 单核晚期：单核靠边区，核被挤到细胞一侧 雄配子体阶段 双核期：核分裂，产生营养细胞与生殖细胞 三核期：有些植物生殖细胞分裂产生2个精子 花粉植株的形态发生 愈伤组织型：番茄、水稻 发生方式 类胚胎型： 烟草 混合型： （一）、花药培养（anther culture） 1花药培养的一般程序 采花蕾或幼穗 预处理 取花药进行表面消毒 接种在培养基上培养 待愈伤组织或类胚体发育到适当阶段移入再生培养基 花粉植株染色体加倍 移苗 2、影响花药培养成功率的因素 供体的基因型 供体植株的生理状况 开花早期、长势好、长期氮饥饿、高海拔、高纬度情况下花粉的培养成功率高， 花粉的发育时期 多数植物单核中、晚期花粉最易诱导 不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期 材料的预处理和预培养 低温预处理（Nitsch和Norreel 1973） 可能机理：细胞均等分裂 保持花粉活力 离心预处理（Tanaka 1973） 乙烯利处理（Bennett， Hughes 1972） 高温处理（Chuong， Bersdorf 1985） 甘露醇处理（卫志明 198