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第七章 微生物发酵过程优化的方法 选育或构建一株优良菌株仅仅是一个开始,要使优良菌株的潜力充分发挥出来,还必须优化其发酵过程,以获得较高的产物浓度(便于下游处理)、较高的底物转化率(降低原料成本)和较高的生产强度(缩短发酵周期) 。 发酵过程优化的目标 使细胞生理调节、细胞环境、反应器特性、工艺操作条件与反应器控制之间这种复杂的相互作用尽可能地简化,并对这些条件和相互关系进行优化,使之最适于特定发酵过程的进行。 一、单因素实验 单因素实验的缺陷 单因素试验法是以因素间没有交互作用为前提,对于大多数培养基组成而言,这种假设往往不成立,采用该法可能导致错误的结论。如果考查多因素的影响,按单因素去进行实验,就需要很长的时间和大量的劳动,本课程介绍2种实验设计方法。 二、正交试验 2. 正交试验的设计方案 (1)确定试验的因素和各因素的水平 3. 实施试验方案 4. 结果分析 三、响应面设计 响应面方法(Response Surface Analysis,简称RSA)是利用合理的试验设计并通过实验得到的一定数据,采用多元二次回归方程来拟合因素与响应值之间的函数关系,通过对回归方程的分析来寻求最优工艺参数,解决多变量问题的一种统计方法。 Y=C1+C2X1+C3X2+C4X3-C5X12-C6X1X2+C7X1X3-C8X22+C9X2X3-C10X32 响应面方法它可用在以下3个方面: ① 描述单个试验变量对响应值的影响; ② 确定试验变量之间的相关关系; ③ 描述所有试验变量对响应值的综合影响。 1. RSA的步骤 (1) 确定因素 :就是研究范围内主要影响加工过程和产品质量的重要因素。当然假设实验者已经知道这些因素是什么。 (2) 确定因素水平 :通过做单因素试验或由样品的特性和工艺来确定因素水平的范围。 (3) 确定实验点 :采用适当的试验设计,确定实验的试验点。 (4) 数据分析 :用适当的统计分析方法和计算机程序,对实验数据进行分析。常有的统计分析软件有SAS、SPSS、 DPS等 2. RSA运用实例 以GABA产量为响应值,运用计算机统计软件进行回归拟合后,各试验因子对响应值的影响可用下列函数表示: Y=3.547+0.5191X1+0.2873X2+0.438X3-0.7908X12- 0.4022X1X2+0.3705X1X3-0.8658X22+ 0.0055X2X3-1.8256X32 为了进一步验证最佳点的值,对回归方程取一阶偏导等于零并整理得: 0.519-1.582X1-0.402X2+0.3705X3=0 0.287-0.402X1-1.732X2+0.0055X3=0 0.438+0.37X1+0.0055X2-3.652X3=0 解得:X1=0.428,X2=-0.067,X3=0.165 换算为培养基成分的浓度,即玉米粉浓度=24.6 g/L,玉米浆浓度=9.46g/L,葡萄糖浓度=8.83g/L。 最后按此培养基组成进行验证,比较优化后与优化前的产量。 二、温和性噬菌体及溶源菌 温和性噬菌体:能导致溶源性反应噬菌体。 状态:a、胞外游离的病毒粒子。 b、原噬菌体(prophage): 即整合在宿主DNA上的或附着在宿主 细胞内的pDNA。 c、营养期的噬菌体,可产生噬菌体DNA 和蛋白质。 三、抗噬菌体菌株的选育 1、专一性噬菌体获得和纯化 2、高效价噬菌体原液的制备 3、噬菌体原液效价测定 4、菌株诱发突变和分离 5、液体摇瓶振荡培养 6、抗性菌株对周围环境中存在的各种噬菌体的抗性 四、抗性菌株的特性研究 1、抗性菌株稳定性试验 2、抗性菌株的产量性能 五、抗噬菌体菌株选育的实例 1、菌种 2、培养基成分 3、噬菌体的分离纯化和原液制备 4、噬菌体菌株的选育 5、菌株抗噬菌体性能的检验 6、摇瓶发酵试验 7、发酵罐发酵试验 1、定义 实验中只有一个影响因素,或虽有多个影响因素,在安排实验时,只考虑一个对指标影响最大的因素,其它因素尽量保持不变的实验,即为单因素实验。 2、步骤 1)确定试验因素的取值范围 x:实验点 a<x<b 2)确定指标 3)根据实际情况及实验要求,选择实验方法,科学安排实验点 在生产实践中,试制新产品、改革工艺、寻求好的生产条件等,这些都需要做试验,而试验总是要花费时间,消耗人力、物力。因此,试验的次数
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