肠杆菌科细菌检验教案分析.ppt

实验三 肠杆菌科细菌检验 目的要求 掌握常见肠杆菌科细菌的培养特性和形态染色特征 掌握常见肠杆菌科细菌的鉴定技术 掌握肠杆菌科微量生化管编码鉴定技术 掌握肠杆菌科临床常见致病菌的血清学凝集技术 检验程序 1. 肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别 细菌在KIA中的生长现象 观察高层与斜面颜色变化情况以及培养基是否变黑 细菌在半固体培养基中的生长现象 观察穿刺线边缘是否清晰及培养基混浊度 有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。培养基混浊。 无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。培养基透明度无变化。 * * 实验材料 一、菌种： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、MAC、SS） 二、生化管： KIA、半固体、肠杆菌科微量生化管编码鉴定管（1套/2人） 三、诊断血清： 沙门菌多价 四、其他： 玻片、盐水、接种环（针）、革兰染液、3%H2O2、氧化酶试剂、液体石蜡 实验内容 一、菌落观察： 大肠埃希菌、沙门菌、普通变形杆菌、肺炎克雷伯菌（BAP、MAC、SS） 菌落形态、颜色、溶血现象、迁徙生长现象观察与描述 二、形态观察： 所有细菌革兰染色 显微镜下细菌形态、染色性观察与描述 三、生化实验： 1. 触酶试验： 2. 氧化酶试验： 3. KIA试验（1支）： 4.半固体试验（1支）： 5. 肠杆菌科微量生化编码管（1支） 6.沙门菌血清学玻片凝集试验 ???? 实验内容（2人/组） 粪 便 肠道选择培养基 可疑菌落 生化反应 血清学实验 结果报告 药敏试验 肠道外标本 血平板、弱选择平板 肠道杆菌的生化反应鉴定 2. 初步分三组 耶尔森菌属 爱德华菌属 哈夫尼亚菌属 枸橼酸菌属 沙雷菌属 摩根菌属 志贺菌属 肠杆菌属 普罗威登斯菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属 埃希菌属 苯丙氨酸（－） VP（＋） 苯丙氨酸（＋） VP（－） 苯丙氨酸（－） VP（－） 3. 肠道杆菌属间鉴定 + -/+ + +/－ + A K 变形杆菌属 + d - － + A A 克雷伯菌属 - - + D/+ + A K 沙门菌属 - +/- - － - A K 志贺菌属 - + +/- － ＋ A A 埃希菌属 脲酶 吲哚 动力 H2S 气体 底层 斜面 MIU KIA 菌属 麦康凯琼脂（MACC） 蛋白胨 20g 氯化钠 5g 琼脂 20-25g 蒸馏水 1000ml 乳糖 10g 1%中性红水溶液 5ml 胆盐 5g ? 配方一 配方二 配方三 配方四 牛肉膏 5 ? ? 5 牛心浸液 ? 1000 ? ? 肉膏液 ? ? 850 ? 胨 5 7.5（胨） ? 5 乳 糖 10 15 10 10 胆盐 10（粗制） 10（透析） 150（ml）（牛胆汁） 8.5（混合） 硫代硫酸钠 12 5 11 8.5 枸橼酸钠 12 15 11 8.5 枸橼酸铁 0.5 ? ? 1 枸橼酸铁铵 ? 1 4 ? 磷酸氢二钠 ? 5 4 ? 琼 脂 25 18 20 13.5 煌 绿 0.33 0.33 1.0 0.33 中性红 22.5 37 70 25 水 1000 ? ? 1000 SS琼脂 (四种配方 ) MACC S