生物化学和分子生物学实验技术2.ppt

“备”则“倍” 有准备、有规划的人生更精彩！ (2) pUC18/pUC19： pUC载体系列是由大肠杆菌pBR322质粒与M13噬菌体改建而成的双链DNA质粒载体，含有来自pBR322质粒的复制起点(ori)，氨苄青霉素抗性基因(ampr)以及大肠杆菌β半乳糖苷酶基因(lacZ)的启动子及其编码α肽链的基因，在lacZ基因中有一个多克隆位点(MCS)区段。当外源的DNA片段插入到这些克隆位点使α互补链破坏时，形成的是无活性的β-半乳糖苷酶，被转化的大肠杆菌细胞，在X-gal (5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷) -IPTG (异丙基硫代β-D-半乳糖苷)培养基上形成白色菌落，而没有外源DNA插入的质粒转化大肠杆菌细胞后，在X-gal-IPTG培养基上形成蓝色菌落。pUC质粒载体比pBR322具有更小的相对分子质量，而且由于rop基因的缺失(其基因产物ROP蛋白，控制质粒复制)，使得其拷贝数大增，每个细胞可达500-700个拷贝，因此由pUC质粒重组体转化的大肠杆菌细胞，可获得高产量的克隆DNA分子。pUC18和pUC19的唯一差别是多克隆位点的方向相反。Xgal可被β-半乳糖苷酶水解生成深兰色的5-溴-4-靛兰，IPTG可诱导β-半乳糖苷酶α-链的合成。 适合于蓝白选择 2λ噬菌体 λ噬菌体的基因组是长度约为50kb的线性双莲DNA分子。在其两端，