白细胞计数,血小板计数要点.pptVIP

白细胞计数 陈新科 济宁医学院附属医院检验科 【目的】 掌握显微镜法白细胞计数的方法。【原理】 采用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。 * * 白细胞计数 目的和原理 实验操作步骤 1.加白细胞稀释液: 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。 2.加血: 用清洁干燥微量吸管吸取抗凝血20μl，擦去管外余血，轻轻加至白细胞 稀释液底部，再轻吸上清液清洗吸管2～3次，混匀。 3.充池: 混匀后用微量吸管将完全变为棕褐色的细胞悬液冲入计数池，室温下平放3～5分钟，待细胞下沉后于显微镜下计数。 4.计数: 用低倍镜依次计数4个大方格内的白细胞数。 改良牛鲍计数板 1855年发明计数红细胞的计数板 血细胞计数板法是最可靠和最经典计数技术 改良Neubauer 计数板 1855年发明计数红细胞的计数板 血细胞计数板法是最可靠和最经典计数技术 改良Neubauer 计数板 改良牛鲍计数板 1mm ← → | | 计算：WBC/L=N/4×10×106×20 1mm ↑ ↓ － － 改良牛鲍计数板 数上不数下 数左不数右 计算方法 白细胞/L=N/4×10×106×20=N/20×109/L N：表示4个大方格内数得的白细胞总数。 ×10：将1个大方格白细胞数换算成1μl血液内白细胞数 106： 1L=106μl 20：为血液的稀释倍数。 注意事项 1．稀释用吸管、微量吸管、改良Neubauer计数板使用前需经过严格的 校正。 2．充池时要一次完成，如充液不足、液体外溢、断续充液、在计数板 中产生气泡、充液后移动盖玻片等，均会使细胞分布不均匀，造成 计数结果不准确。 3．计数池内细胞分布应均匀，一般情况下各大方格间的细胞数相差不 超过10%。若相差太大，应重新充池。 4．计数大小方格内的压线细胞时，遵循数上不数下、数左不数右的原 则。 5．白细胞数量过多时，可采用加大稀释倍数的方法。白细胞数量过少 时，可采用扩大计数域或减少稀释倍数的方法。 6．白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，它可使白细胞计数结果偏高， 此时应计算白细胞校正值。 白细胞分类计数 白细胞分类计数 目的和原理 【目的】 掌握显微镜外周血白细胞分类计数的方法及各种白细胞的正常形态。 【原理】 将血液制成细胞分布均匀的血涂片，用瑞氏染液染色，根据各类细胞的形态特点和颜色差异将白细胞区别并进行计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占的百分率。 血涂片制作 载玻片 推片 血液 将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度：快、大(厚)。慢、小（薄） 一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明 涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号 B 123 血涂片染色 勿冲洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后将Ⅰ液和Ⅱ液充分混允静置10分钟 直接流水冲洗3-5分钟 （切勿先倒掉染液） 涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞 B123 涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟 血涂片的观察 经染色后的血涂片先用低倍镜观察： 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱） 2.观察细胞分布情况，选择细胞分布均匀之处转浸油镜进行白细胞分类计数。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。 B123 外周血中白细胞形态 白细胞 中性粒细胞 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 外周血中白细胞形态 中性粒细胞杆状核 中性粒细胞分叶核 外周血中白细胞形态 嗜酸性粒细胞 嗜碱性粒细胞 外周血中白细胞形态 淋巴细胞 单核细胞 嗜酸性粒细胞计数 嗜酸性粒细胞计数 目的和原理 【目的】 掌握嗜酸性粒细胞直接计数的方法。 【原理】 用嗜酸性粒细胞稀释液，将血液稀释一定倍数，使大部分的红细胞和其他白细胞破坏，并使嗜酸性粒细胞着色。将稀释的细胞悬液滴入血细胞计数板，计数一定体积内的嗜酸性粒细胞数，经过换算得出每升血液中的嗜酸性粒细胞数。 器材与试剂 【器材】 同白细胞计数 【试剂】嗜酸性粒细胞稀释液为低渗溶液，可使红、白细胞溶解破裂，而嗜酸性细胞对低渗抵抗大，故能保存。 1、伊红─丙酮稀释液： 20g/L伊红：使嗜酸性颗粒着色 丙酮：保护嗜酸性粒细胞 蒸馏水 本试剂新鲜效果好，最好一周配一次。 2、溴甲酚紫稀释液：（低渗溶液） 溴甲酚紫：指示剂，着蓝色 蒸馏水 实验操作步骤