蛋白质一级结构测序分析.pptVIP

测定蛋白质氨基酸顺序的重要意义： 测定蛋白质中的AA顺序，是走向阐明其生物功能基础中的很重要步骤。顺序可以给出更多的信息。 为了了解多肽链折叠成三维构象所受到的限制，顺序测定是必须的。 AA顺序的改变可以导致异常的功能和疾病，所以顺序测定是分子病理学的一个重要部分。 蛋白质中的AA顺序很能指明它的进化史。 测定蛋白质一级结构的前提 1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的分子质量，其误差允许在10%左右 8、确定半胱氨酸残基间形成二硫键交联桥的位置 不包括辅基成分分析 尿素和盐酸胍与蛋白质的可能作用方式： a.与肽链竞争氢键 b.增加非极性侧链在 水中的溶解度 （九）蛋白质测序举例 胰岛素测序自学 （九）蛋白质序列数据库 60年代中期到80年代初，美国国家生物医学研究基金会(National Biomedical Research Foundation，简称BNRF) 将搜集到的蛋白质序列和结构信息以“蛋白质序列和结构地图集”(Atlas of Protein Sequence and Structure)的形式发表，主要用来研究蛋白质的进化关系。 1984年，“蛋白质信息资源”(Protein Information Resource，简称PIR)计划正式启动，蛋白质序列数据库PIR也因此而诞生。 1988年，美国的NBRF、日本的国际蛋白质信息数据库(Japanese International Protein Information Database，简称JIPID)和德国的慕尼黑蛋白质序列信息中心(Munich Information Center for Protein Sequences，简称MIPS)合作成立了国际蛋白质信息中心(PIR-International)，共同收集和维护蛋白质序列数据库PIR。  同源蛋白质：来自不同生物体、 执行同一 /相似功能的蛋白质 同种蛋白质：来自相同生物体、 执行同一功能的蛋白质 一百多个AA残基 MW约12.5×103 2 8个不变残基  细胞色素C的AA序列差异可用于核对各物种间的分类学关系以及绘制系统树/进化树。 （三）血液凝固与AA序列的局部断裂 （一）肽的人工合成 保护（氨基、羧基、侧链活性基团） 活化（氨基、羧基） 缩合剂 （二）胰岛素的人工合成（三）固相肽合成 练习题 P195 4,6,7,9(下周三之前交） 嗜热菌蛋白酶 R2=Phe, Trp, Tyr; Leu，Ile, Met以及其它疏水性强的氨基酸水解速度较快。 R2=Pro或Gly 水解受抑。 R1或R3=Pro 水解受抑。 梭菌蛋白酶 梭状芽孢杆菌中分离，专一性强 R1=Arg 。 化学法：可获得较大的肽段 溴化氰水解法：它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 羟胺（NH2OH）：专一性断裂-Asn-Gly-之间的肽键。也能部分裂解-Asn-Leu-之间的肽键以及-Asn-Ala-之间的肽键。 N-端分析法特点：能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。 1、 Edman法 （六）肽段氨基酸序列的测定 （苯异硫氰酸酯法） Edman于1950年首先提出。 顺序分析的 最主要的方法 PITC PTC-肽 2、氨肽酶法或羧肽酶法 3、质谱法（MS） 灵敏度高、所需样品少、测定速度快 质谱法(Mass Spectrometry, MS)，即用电场和磁场将运动的离子（带电荷的原子、分子或分子碎片）按它们的质荷比分离后进行检测的方法。测出了离子的准确质量，就可以确定离子的化合物组成。这是由于核素的准确质量是一多位小数，决不会有两个核素的质量是一样的，而且决不会有一种核素的质量恰好是另一核素质量的整数倍。 核糖体 蛋白质链 4.根据核苷酸序列的推定法 （七）肽段在多肽链中次序的决定 重叠肽（overlaping peptide）—— 片段重叠法重建完整多肽链一级结构 片段重叠法重建完整多肽链一级结构 ?所得资料： 氨基末端残基 H 羧基末端残基 S 第一套肽段 第二套肽段 OUS SEO