第讲克隆基因的表达与产物纯化外源基因在真核细胞中的表达分析.ppt

酵母菌載體 (Yeast vector) 依其能否獨立複製 (是否具有複製相關序列)可分為：一、Integrating vector：無法自行獨立複製。載體不具複製序列，必須嵌入酵母菌的染色體內才能隨著細胞分裂時複製。純粹是基因選殖時，製備 gene library時使用。二、Replicating vector：具有複製相關的序列，依其複製序列種類分為：(1)??2 μ plasmid：從酵母菌天然的質體上截取一段包含複製序列的 2μ DNA。其優點是非常穩定，可確保細胞分裂時，質體的性狀可移交到子代中不會遺失。而且是 high-copy number的質體。(2) ARS plasmid：從酵母菌的染色體中截取一段ARS element，ARS是表示Autonomously replicating sequence。ARS-containing plasmid的穩定性較差，質體常被分解而無法代代相傳 。但是若加入一段centromere (CEN) sequence (稱CEN plasmid)，就可使質體穩定性提高。但是其copy number較低，一般僅為 single copy。因此要選擇 2 μplasmid或 CEN plasmid依實驗者所需的 copy number而定，Copy number 的多寡常會影響訊息表現的程度，因此：若