第二章DNA的复制分子生物学分析.pptVIP

一、DNA 复制假说 Meselson－Stahl实验 对15NDNA、14NDNA杂交分子经加热变性，对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯度离心。 ＊ 1963年Cairns用放射自显影方法阐明了大肠杆菌DNA的复制是半保留复制且DNA是环状分子。 二、半保留复制 2、DNA半保留复制的类型 2） 环状DNA：θ型（双向、单向）、 D型、滚环 3、参与DNA复制的物质 4）DNA聚合酶（DNA Polymerase）： 以dNTP为前体催化合成DNA 需要模板和引物的存在 不能起始合成新的DNA链 催化dNTP加到生长中的DNA链的3’-OH末端 催化DNA合成的方向是5→3 A 原核生物聚合酶 在复制叉处为一二聚体 核心酶（core enzyme）：α、ε、θ。 α：聚合作用； ε：3’－5’外切；θ：与亚基结合有关； γ、δ、δ’、χ、ψ提高反应速率和持续性； β：使DNApol能结合在DNA上。β亚基结合于DNA时消耗ATP；如同一个夹子，使DNApolⅢ结合于DNA。 τ：使两个DNApol单体形成二聚体，分别在复制叉的两个链上作用。 DNA Polymerase III Holoenzyme 5） 解链酶（unwinding enzyme/ helicase ） 6） 引物酶（Pr