第二十章蛋白质的复性分析.ppt

蛋白质的复性 蛋白质的复性 为什么要进行蛋白质的复性？ 外源基因导入E.coli等宿主细胞并表达蛋白质产物（ r-干扰素，白细胞介素-2，人生长激素等）时，相当多的产物形成了包涵体，而没有蛋白质的活性。所以要进行蛋白质的复性。 1.什么是包涵体？ 2.为什么选择原核表达系统（特别是 E.coli ）？ 蛋白质复性 蛋白质复性 包含体形成的原因 包涵体的形成比较复杂，有些机理还不清楚； (1)表达量过高：包含体的形成与细胞内蛋白质的生成速率有关，新生成的多肽浓度较高，无充足的时间进行折叠，从而形成非结晶、无定形的蛋白质的聚集体； (2)包含体的形成还被认为与宿主菌的培养条件，如培养基成分、温度、pH值、离子强度、氧化还原电势及蛋白质转运系统的功能等因素有关。 (3)大肠杆菌的生长过程在受到某些因素的影响时，其本身蛋白质的表达也可出现异常，造成蛋白质的聚集从而形成包含体。 蛋白质复性 包含体形成的原因 （4）重组蛋白的氨基酸组成 （5）重组蛋白时大肠杆菌的异源蛋白，缺乏一些蛋白折叠过程中所需要的酶和辅助因子。 （6）在细菌表达蛋白过程中，蛋白质分子间的离子键、疏水键或共价键等化学作用导致了包涵体的形成。 蛋白质复性 包含体的形成的优势 形成包含体对克隆基因的表达产物蛋白质具有保护作用，大肠杆菌可产生蛋白质水解酶，可降解不稳定的多肽，许多可溶