第酵母基因工程基因工程原理与技术刘志国分析.ppt

作为宿主细胞的酵母需满足的基本要求 ①安全无毒，没有致病性。 ②遗传背景清楚，容易进行遗传操作。 ③外源DNA容易导入宿主细胞，转化效率高。 ④培养条件简单，容易进行高密度发酵。 ⑤有较强的蛋白质分泌能力。 ⑥有类似高等真核生物的蛋白质翻译后的修饰加工能力。 第一节 酵母基因工程表达体系--------载体 酵母菌转化方法 产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母 整合型重组巴斯德毕赤酵母的构建 PARS2 Bgl II 5’ AOX1 HBsAg PHIS4 3’ AOX1 Bgl II pBSAG151 11 kb Bgl II 5’ AOX1 HBsAg PHIS4 3’ AOX1 his+的转化子 重组分子 转化his-的受体细胞 染色体DNA 产乙肝表面抗原的重组巴斯德毕赤酵母 由于巴斯德毕赤酵母染色体DNA上还拥有第二个乙醇氧化酶基因 AOX2，所以整合型重组菌仍能在含有甲醇的培养基上生长。 重组菌首先在含有甘油的培养基中培养，待甘油耗尽后，加入甲 醇诱导HBsAg表达，最终S蛋白的产量可达细胞可溶性蛋白总量的3% 在大规模的生产过程中，巴斯德毕赤酵母工程菌在一个240L的 发酵罐中培养，最终可获得90克22nm的HBsAg颗粒，足够制成 900万份乙肝疫苗。