第五章高效毛细管电泳和电动色谱分析.ppt

第五章 高效毛细管电泳和毛细管电动色谱分析法 第一节 概述 电泳：带电粒子在电场作用下于一定介质中发生定向运动的现象。 高效毛细管电泳：以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力进行高效、快速分离的一种电泳技术。 当电场强度一定时离子的电泳淌度不同，在电场中的移动速率不一样，利用这个原理可以将不同的离子彼此分离。 2、 毛细管温度控制 电泳温度的选择应考虑热效应控制、重现性控制、分离效率控制和分离介质对温度的限制等因素。 可以用空气循环或水循环的方式降温。 还有一种固体恒温方式，采用热传导系数高的合金材料制成电热控制器，可以快速散发焦耳热。 第五节 实验技术 一、毛细管涂层技术 凝胶管结构设计： 主要包括凝胶浓度、梯度、性质等。结合分离对象，考虑是否需要使用尿素、SDS或环糊精等添加剂，是否需要涂层毛细管内壁，并考虑毛细管的尺寸等。毛细管结构确定后，即可配制单体溶液。 第六节 应用 离子分析 DNA分析 肽和蛋白质分析 手性分离 药物分析和临床检测 * * 2 毛细管电泳的基本原理 3 毛细管电泳装置 4 毛细管电动色谱 5 实验技术 6 1 概述 应用 一、发展历史 目前：分析化学领域中发展最快的分离技术 1930年，瑞典化学家Tiselius（1948年荣获诺贝尔化学奖） 1981年，Jorgenson和Lukacs成功地对丹酰化氨基酸样品进行了快速、高效分离。 二、优缺点 样品量少、操作简便、分离效率高、分析成本低、应用面广。 但CE制备能力差，在进样的准确性和检测灵敏度等方面比高效液相色谱法略逊。 三、分类 毛细管区带电泳（CZE） 毛细管等速电泳（CITP） 毛细管等电聚焦（CIEF） 毛细管电动色谱（CEC） 亲和毛细管电泳（ACE） 一、电泳分离基础 1、电泳淌度 式中，ue为电泳淌度；E为电场强度；为组分的分离度；为组分的电动电位；ε为介质的介电常数；η为介质的粘度；d为与离子大小有关的常数 第二节 毛细管电泳的基本原理 2、电渗流 电渗流是指毛细管中的溶剂在轴向直流电场作用下而发生的定向流动现象。 N N N N N N 界面 吸附层 紧密层 扩散层 管壁 毛细管内壁的双电层模型 -.荷负电粒子； +.荷正电粒子； N.电中性粒子 电渗流与高效液相色谱的流型对比 与电泳类似，常用电渗淌度表示电渗流大小，如下式所示： 式中，ν为电渗淌度；μeo为电渗速度. 在电渗流存在的情况下，组分的迁移速度是它的电泳速度和电渗流速度的总和，可以用下式表示： 二、毛细管区带电泳 特征：是整个系统都用同一种电泳缓冲液充满.缓冲液由缓冲试剂、pH调节剂、溶剂和添加剂组成。 分离原理：当电流通过时，缓冲液中的阳离子、阴离子分别以恒定的速度向阳极和阴极移动，由于试样中各个组分间荷质比的差异，以不同的速度在分立的区带内进行迁移.如果试样中各个组分的迁移率差别较大，就能将各个组分分离。 特点：速度快、分辨率高、消耗低等。 水中无机阴离子及有机酸根的分离图谱。 15 31 16 32 4 3 2 1 5 7 8 10 14 17 19 20 21 22 24 25 26 27 28 30 34 35 36 6 11 12 13 18 23 29 33 t/min 1.40 1.80 1.60 2.00 2.20 2.40 2.60 2.80 10 9 36种阴离子的CZE分离图谱 1.S2O32-；2. Br-；3.Cl-；4.SO42-；5. NO2-；6. NO3-；7. 钼酸根；8. 叠氮（化物）；9. WO42-；10.一氟磷酸根；11.ClO3-；12.柠檬酸根；13. F-；14.甲酸根；15. PO43-；16. 亚磷酸根；17. 次氯酸根；18. 戊二酸根；19. 邻苯二甲酸根；20. 半乳糖二酸根；21. 碳酸根；22. 乙酸根；23. 氯乙酸根；24. 乙基磺酸根；25. 丙酸根；26. 丙基磺酸根；27. 天冬酸根；28. 巴豆酸根；29. 丁酸根；30. 丁基磺酸根；31. 戊酸根；32. 苯甲酸根；33. L-谷氨酸根；34. 戊基磺酸根；35. d-葡萄糖酸根；36. d-半乳糖醛酸根. 三、毛细管凝胶电泳 毛细管凝胶电泳 CGE）：按照试样中各个组分相对分子质量的大小进行分离的方法。 用途：常用于蛋白质、寡聚核苷酸、核