生化综合性试验分析.docVIP

实验四十五 胃蛋白酶在水溶液和有机溶剂中 的动力学测定 一． 目的和要求 1 学习并掌握胃蛋白酶活性测定的基本原理。 2 掌握在水相和有机相中胃蛋白酶Km、Vmax测定的实验设计和测定原理。 3 学习和理解酶促反应动力学曲线的实验设计和实验方法。 4 熟练掌握紫外分光光度计的使用方法。 二． 实验原理 近几年，酶在有机介质中催化反应的研究十分活跃，日益增多的研究报导和综合评述展示了有机溶剂中的酶优于水相酶的巨大应用潜力。而酶在有机介质中催化活性的充分发挥和催化选择性的调节与控制是有机溶剂中酶催化研究的重要基础与核心有机溶剂中的酶催化已经进行了四种体系的研a.单相共溶剂体系(水/水溶性溶剂b.水-有机溶剂两相体系；c.微水有机溶剂体系；d反向胶束体系reversed micelles）。有机相中酶促反应的过程、机制与水溶液中是相同的，符合米氏方程、乒乓反应机制。 米氏酶在非水介质中的反应符合Michaelis-Menten公式，影响有机介质中酶促反应动力学变化的因素涉及底物和溶剂的性质。酶和溶剂竞争底物，如果底物与溶剂的亲和性高，则底物与酶的亲和力低，Km大；如果底物与溶剂的亲和力低，则酶与底物的亲和力高Km小。 胃蛋白酶（Pepsin）是一种巯基蛋白酶，它分解比胰脏蛋白水解酶更多、更广泛的蛋白底物，它也具有脂酶活力。其分子量约为23 0