10微生物发酵制药工艺1分析.ppt

D 连续式操作 概念：培养液一起装入发酵罐，接种后培养过程中，不断补充新培养基,同时取出包括培养液和菌体在内的发酵液，直至发酵结束。 特点：恒定状态的发酵，发酵罐内体积及其物系的组成将不随时间而变。培养基连续稳定流加；产物连续稳定收获；提高菌体密度；自动化。 缺点：时间长，杂菌污染、突变机会增多。 E 灌流（注）式操作 概念：培养液与菌体一起装入发酵罐，菌体培养过程中，不断补充新培养基，取出部分条件培养基，菌体仍然滞留罐内。 特点：除去有毒害的代谢物，补充营养物质。 10.7 发酵培养工艺控制 微生物发酵生产水平取决于: 生产菌种性能与合适的环境条件 发酵过程各种参数处于不断变化状态 关键在于过程检测与控制 检测仪器与主要参数 原位传感器：pH，溶氧，温度，压力 在线仪器：尾气分析仪 离线仪器：基质、产物浓度 生物学参数：菌体浓度，形态，杂菌 物理参数：温度，压力，搅拌，粘度 化学参数：基质浓度，pH，溶解氧，尾气，补料，消泡 1 生物学检测主要的参数与控制 （1）细胞形态 镜检： 显微镜检测，染色，光学、荧光，电镜 应用：是否污染，发酵过程状态，菌种的真实性。 （2）菌体浓度概念：单位体积发酵培养液内菌体细胞的含量。 应用：决定适宜补料量、供氧量等，以得到最佳生产水平。 （3）临界菌体浓度控制概念： 摄氧速率与氧传递速率平衡时的菌体浓度 菌体浓度超过此浓度，抗生素的生产速率会迅速下降。 菌体遗传特性与发酵罐氧传质特性的综合反映。 2 物理参数的检测与控制 （1）温度的检测与控制 发酵温度概念:发酵中的所维持温度在生长和生产的最适温度范围内 测定：热电阻等热敏原件测定，温度计上读出。 发酵热（fermentation heat）：产生热与散失热之差 产生热：生物热和搅拌热 散失热：蒸发热、显热和辐射热。 Q发酵＝Q生物＋Q搅伴－Q蒸发－Q显－Q辐射 （2）压力的检测与控制 概念：罐体内的压力，由压力表读出。 罐压的影响：维持正压，防止污染;CO2和O2的溶解度 不同生物对压力耐受不同 控制：进或出口阀门，进入或排出气体或空气流量 维持工艺所需压力：0.02－0.05 MPa （3）搅拌的检测与控制 搅拌的影响： 气体的传递速度和发酵液的混合均匀程度 搅拌指标： 搅拌转速和搅拌功率。 搅拌控制策略： 发酵中不同阶段对氧需求进行调节。 3 化学参数的检测与控制 基质浓度 pH 溶解氧 尾气 （1）基质浓度：发酵液中糖、氮、磷等发酵液中营养物质的浓度 （2）pH检测与控制：发酵中pH的变化是酸和碱综合表现。 酸的来源： 糖类原料中的酸性杂质； 糖在高温灭菌中氧化或反应生成酸； 糖被代谢生成有机酸，分泌到培养液。 碱的来源： 水解酪蛋白和酵母粉等作为碳源利用。 控制pH策略 分阶段控制：生长最适pH和产物最适pH。 缓冲液控制：碳酸钙和磷酸盐缓冲液。 补加酸或碱进行控制： 补料方式控制：流加糖率来控制pH。 （3）溶解氧概念：溶于培养液中的氧含量 表示：绝对含量，饱和氧浓度的百分数。 检测：在线溶氧电极。 控制策略：供应量和需要量二个方面考虑使之需氧不超过设备的供氧能力。 （4）其他工艺条件 改变培养基粘度 液化培养基 中间补水 添加表面活性剂等 间接策略:控制菌体浓度 4 泡沫foam的检测与控制 概念： 气体分散在少量液体中，气体与液体之间被一层液膜隔开就形成了泡沫。 液面上的泡沫，气相所占比例大，与液体有明显界限。 流态泡沫，分散于发酵液内部，比较稳定，与液体之间无明显界限。 （1）泡沫形成的原因及其影响 发泡物质：蛋白质类、糖类，黄豆饼粉，代谢产物。 快速搅拌、灭菌体积太大或不彻底。 发泡影响：减少装料量，降低氧传递。 逃液，增加了污染，甚至无法搅拌。 菌体呼吸受阻，代谢异常或自溶 （2）泡沫控制 培养基调整与工艺控制； 少加或缓加起沫基质； 改变发酵条件，如pH、升高温度、减少通气、降低搅拌速率; 改变发酵工艺，如分批投料。 机械消沫mechanical defoaming 机械强烈震动或压力变化使泡沫破裂。 罐内消沫桨转动打破泡沫 泡沫引出罐外，通过喷嘴加速力或离心力消除泡沫。 消沫转子上添加消沫剂，能增强消沫效果。 优点：节省原料，污染机会低，但效果不理想。 化学消沫 用消沫剂(defoamingagent)消沫 机理：加入消沫剂，降低了泡沫的液膜强度和表面黏度，使泡沫破裂。 种类： 天然油脂类：动植物油脂 高碳醇脂肪酸和酯类：十八醇，聚乙二醇。 聚醚类：聚氧乙烯氧丙烯甘油，泡敌 硅酮类：不容于水，10％乳液。 消沫剂的使用 取决于在发酵液中扩散能力。 与惰性载体、乳化剂或分散剂并用 消沫剂之间联合使用，也能互补增效。 消沫剂的添加会影响发酵过程，微生物的生长和产物的合成，要注意其不良