基因工程.分析.pptVIP

专题1 基因工程 基础理论和技术发展催生了基因工程 4 DNA体外重组的实现 小结：基因工程的建立过程 基础理论的重大突破 1.DNA是遗传物质的证明 2.DNA双螺旋结构和中心法则的确立 3.遗传密码的破译 技术发明使实施成为可能 1.基因转移载体的发现 2.工具酶的发现 3.DNA合成和测序技术的发明 4.DNA体外重组的实现 5.重组DNA表达实验的成功 6.第一例转基因动物问世 7.PCR技术的发明 专题1. 内容概述 基因工程的概念： 基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术或基因拼接技术。 别 名： 操作环境： 原 理： 操作水平： 结 果： 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 1、简称： 2、分布：? 限制酶的识别特点 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如： GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” 3、特点: 　 一、限制性核酸内切酶 ——“分子手术刀” ?? ④作用： ⑤结果： 工具1：限制性核酸内切酶 　 工具3：运载体 1、需要的条件： 　⑴有1~多个限制酶切点 　⑵能在受体细胞中自我复制，或整合到受体细胞的 染色体DNA上复制 　⑶有某些标记基因，便于筛选 ⑷对受体细胞无害 2、常用运载体： 　 质粒、λ噬菌体的衍生物或某些动植物病毒 3、质粒　 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 1、在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 切割DNA 产生黏性未端和平末端 ?? 3、特点: ?? 4、作用： 5、结果： 1、简称： 2、来源： 主要在原核生物中 限制酶 识别特定核苷酸列, 切割特定切点 （专一性） 切割DNA 产生黏性未端或平末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 思考? Go back ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 1、作用: 把DNA片段拼接成新的DNA， 2、作用原理： 催化磷酸二酯键形成,不是氢键 二、 DNA连接酶 ——“分子缝合针” 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 T4DNA连接酶 3、类型： 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和 平末端