基因工程2分析.ppt

基础理论  和技术的发展 催生了基因工程 1.1 DNA重组技术的基本工具 是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品 基因操作的工具 基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶（限制酶） 基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶 ?基因的运输工具（分子运输车） ——运载体??? （1）限制酶???  ①分布：主要在原核生物中。 ②作用特点:专一性，识别特定核苷酸序列，切割特定切点。 ?? ③结果：产生黏性未端和平末端 ??? ④举例：EcoR1限制酶、Sma1限制酶??? 限制酶的识别特点 以中轴线双侧的DNA上碱基呈反向对称，重复排列 如：GAA TTC CCC GGG CTT AAG GGG CCC （2）DNA连接酶???  ①连接的部位：磷酸和脱氧核糖之间的键： 磷酸二酯键（梯子的扶手） ②结果：两个相同的未端的连接。 ③举例：E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 ?? （3）运载体???  ①作用：将外源基因送入受体细胞。 ②具备的条件： 能在宿主细胞内复制 并稳定地保存。???????????????具有多个限制酶切点。???????????????具有某些标记基因 对受体细胞无害 ③举例：质粒、噬菌体 和动植物病毒。??? 第一步：获取目的基因方法： 1.从基因文库中获取目的基因。 基因文库的构建模式图 第一步：获取目的基因方法： 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA PCR的过程 （1）以DNA 片段作模板，在 90℃ 高温下，分开成 为 单链DNA。 （2）以DNA 小段寡聚核苷酸做引物，在 50℃ 的温度下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合 （3）在 70℃ 高温下，合成一条与模板 DNA 单链（正链或负链）互补结合的DNA新链。 （4）以上三个步骤周而复始，即反应体系的温度从 90oC- 50oC- 75oC，目的基因的量不断增加 反应体系中经历：变性——淬火——合成——重复 。 结果：目的基因的量成指数形式扩增（2n) 第一步：获取目的基因方法： 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA 3. mRNA差异显示法获得目的基因 （反转录） 由mRNA反转录形成cDNA mRNA DNA单链 DNA单链 RNA – DNA杂交分子 RNA – DNA杂交分子 单链DNA 单链DNA 双链DNA 第一步：获取目的基因方法： 1.从基因文库中获取目的基因。 2.利用PCR技术合成DNA 3. mRNA差异显示法获得目的基因 （反转录） 4.采用DNA合成仪人工合成长度不是很大的DNA片段。 5.用机械的方法，如超声波把打成片段。 第二步： 基因表达载体的构建 总结：表达载体需由哪几部分组成 复制原点 启动子 目的基因 终止子 标记基因 第三步：将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入植物细胞 将目的基因导入动物细胞 将目的基因导入微生物细胞 第四步：目的基因的检测与鉴定 首先： 其次： 最后： 还要： DNA分子杂交技术 基因探针：核酸分子探针是指特定的已知核酸片段，能与互补核酸序列退火杂交，用于对待测核酸样品中特定基因顺序的探测。 满足：（1）必须是单链，（2）带有容易被检测出来的标记物。 1、3 基因工程的应用 1、4蛋白质工程的崛起 蛋白质工程的概念 是研究蛋白质的结构及结构与功能的关系，然后人为地设计一个新蛋白质