艾滋病实验室检测(妇保)分析报告.ppt

艾滋病实验室检测 郭志宏 （0571 浙江省疾控中心 艾滋病确证中心实验室 内容提要： 1.艾滋病实验室检测目的、方法。 2.艾滋病检测样本的采集和处理。 3.HIV抗体检测方法目的要点和流程。 4.HIV抗体快速检测方法原理应用评价。 5.艾滋病抗体检测结果的处理及应用。 6.HIV-1抗原检测 7.HIV核酸检测 8.HIV-1耐药检测 9.CD4/CD8+T淋巴细胞检测 1、艾滋病检测的医学目的 个体：诊断感染状态，感染者知道自己的感染情况，减少传播，及时寻求治疗。 传染病管理：疾控机构及时的发现传染源、配偶（固定性伴）的检测、随访和干预，发现管理感染者、提供关怀服务。 医疗机构：及时的医疗服务和医源性感染的预防 1.1HIV相关检测方法 A 常用HIV病原学检测方法: 核酸检测（ 定性、定量）、P24抗原检测、病毒培养分离 B 常用HIV抗体检测方法: 初筛：1.酶联免疫吸附法 ELISA：第三代、第四代。2.快速检测 RT：金标、硒标。3.简单法 PA: 明胶颗粒凝集 确证：免疫印迹法 WB、RIBA C 其他相关检测方法: 免疫功能测定：CD4/CD8检测 2、样品的采集和处理 2.1样品的种类和用途： 1 HIV抗体检测：全血、血清、血浆、唾液、尿液以及DBS样品。 2 CD4+T淋巴细胞测定：抗凝全血。 3 HIV-1病毒载量：血浆。 4 HIV-1核酸的定性检测和基因型耐药检测：全血、血浆、PBMC及DBS样品。 5 HIV分离培养：PBMC、全血。 2.2样品的保存 1 用于抗体和抗原检测的血清或血浆样品，1周内可存放于2～8℃， 一周以上应存放于-20℃以下。 2 用于核酸检测的血浆和血细胞样品4天内检测可存放于4℃，3月内存放-20℃以下。3月以上应置-70℃以下。 3 用于CD4检测的全血可存放于室温（18～25℃） ，一般当天送检。 4 阴性样品至少保存1～2个月。阳性样品保存至少10年。 2.3 样本运输 1. 应采用三层容器包装。 2. 用于抗体检测的血清和血浆样品应在冷藏下（2～8℃）运送。用于CD4+和CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下（18～25℃）运送。用于病毒载量检测的样品应在-20℃以下运输。DBS样品应在室温下（18～25℃）运送。 3、HIV抗体检测方法 检测HIV抗体是HIV/AIDS诊断的一项重要指标，HIV抗体测定作为血清学诊断要求准确、可靠，经初筛、复检试验和确证实验三个步骤。 3.1 HIV抗体检测目的 HIV抗体检测可用于诊断、血液筛查、监测等。 3.2 HIV抗体检测的要点 1 根据目的选择检测方法及检测策略。 2 严格遵守实验室SOP。 3 筛查试验阳性，须作确证试验。 4 筛查试验阴性， 不应做确证试验。 5 筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。 3.3HIV抗体筛查检测流程 初筛试验 1、HIV抗体检测分为筛查试验（包括初筛和复检）和确证试验。 2、根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛检测，对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。 复检试验 使用原有试剂和另外一种不同原理或另外两种不同原理（或厂家）的试剂进行复检。如两种均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性（-）；如均呈阳性反应，或一阴一阳，需进行确证试验。 如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。如果抗原抗体联合试剂检测呈阳性反应，而抗体试剂检测为阴性反应，则应考虑进行HIV-1 p24抗原或核酸检测，必要时进行随访。 筛查试验呈阳性反应样品的转送 筛查试验呈阳性反应样品，需要核对身份，补充个人信息（如姓名和身份证号码），采集第二份血样，持HIV抗体筛查报告，送当地艾滋病筛查中心实验室，或直接送确证实验室。 确证试验 1 确证试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。 2 确证样品可采用血清、血浆、滤纸干血斑样品。 3 确证方法包括免疫印迹试验（WB）、条带免疫试验（RIPA） 、放射免疫沉淀试验及免疫荧光试验（IFA）等。 3.5艾滋病检测实验室检测信息上报 各级艾滋病检测实验室所在机构每月应填写《HIV抗体检测数及阳性人数统计报表》（附表6），并于每月10日前完成网络直报。未开展网络直报的单位，由县级疾病预防控制机构收集信息后统一上报。 4、艾滋病快速检测试验（RT） 是ELISA发展起来的一种检测技术，它用胶体金或硒标记抗原、抗体后以层析方法进行检测。 突出优点为快速、试剂便于