氨基酸发酵工艺学分析报告.ppt

氨基酸发酵工艺学 第一节 学习氨基酸发酵工艺学的目的研究对象、任务及内容 氨基酸发酵是典型的代谢控制发酵,由发酵所生成的产物——氨基酸,都是微生物的中间代谢产物,它的积累是建立于对微生物正常代谢的抑制。在脱氧核糖核酸(DNA)的分子水平上改变、控制微生物的代谢,使有用产物大量生成、积累。 以探讨氨基酸发酵工厂的生产技术为主要目的。氨基酸发酵生产以发酵为主,发酵的好坏是整个生产的关键,但后处理提纯操作和提纯设备选用当否,也会大大影响总的得率。氨基酸发酵工艺学研究的对象应该包括从投入原料到最终产品获得的整个过程,其中有微生物生化问题、生化工程问题,也有分析与设备问题。 今后的发展是采用诱变、细胞工程、基因工程的手段选育出从遗传角度解除了反馈调节和遗传性稳定的更理想菌种,提高产酸;采用过程控制,进行最优化控制,连续化、自动化,稳产、高产;探求新工艺、新设备,以提高产率和收得率;研究发酵机制等问题,以便能更好地控制氨基酸这样微生物中间代谢产物的发酵。 第二章 谷氨酸发酵机制 第一节 谷氨酸的生物合成途径 一、生成谷氨酸的主要酶反应 (1)谷氨酸脱氢酶(GHD)所催化的还原氨基化反应 (2)转氨酶(AT)催化的转氨反应 (3)谷氨酸合成酶(GS)催化的反应 二、谷氨酸生物合成的理想途径  由葡萄糖发酵生成谷氨酸的理想途径如下 谷氨酸发酵的代谢途径如下图所示 黄色短杆菌中谷氨酸的代谢调节机制如下图所示 ⑴优先合成 谷氨酸比天冬氨酸优先合成，谷氨酸合成过量后，抑制和阻遏自身的合成途径，使代谢转向合成天冬氨酸。 ⑵谷氨酸脱氢酶(GDH)的调节 谷氨酸对谷氨酸脱氢酶存在着反馈阻遏和反馈抑制。 ⑶柠檬酸合成酶的调节 柠檬酸合成酶受能荷调节、谷氨酸的反馈阻遏和顺乌头酸的反馈抑制。 ⑷异柠檬酸脱氢酶的调节 细胞内α-酮戊二酸的量与异柠 檬酸的量需维持平衡。当α-酮戊二 酸过量时,将对异柠檬酸脱氢酶发生 反馈抑制作用,停止合成α-酮戊二酸。 ⑸α-酮戊二酸脱氢酶在谷氨酸产生 菌中先天性的丧失或微弱。 ⑹磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶受天冬 氨酸的反馈抑制，受谷氨酸和天冬氨 酸的反馈阻遏。 三、谷氨酸生产菌的育种思路 谷氨酸生产菌的具体育种思路 1.切断或减弱支路代谢 2.解除自身的反馈抑制 3.增加前体物的合成 4.提高细胞膜的渗透性 5.强化能量代谢 6.利用基因工程技术构建谷氨酸工程菌株 1.切断或减弱支路代谢 ⑴选育减弱α-酮戊二酸进一步 氧化能力的突变株 从谷氨酸生物合成的代谢途径 可以看出，减弱α-酮戊二酸脱氢酶 复合体的活性，可以使代谢流向谷 氨酸，从而使谷氨酸得到积累。 如果削弱或切断这些物质的合 成途径，就会使谷氨酸的产率增加。 这可通过选育莽草酸缺陷型或添加 芳香族氨基酸能促进生长的突变株 以及抗嘌呤、嘧啶类似物或核苷酸 类抗生素，如德夸菌素、狭霉素C抗 性突变株来实现。 ⑵选育减弱HMP途径后段酶活性的突 变株 在谷氨酸生物合成途径中，从葡 萄糖到丙酮酸的反应是由EMP途径和 HMP途径组成的。但是，通过HMP途径 也可生成核糖、核苷酸、莽草酸、芳 香族氨基酸、辅酶Q、维生素K、叶酸 等物质。这些物质的生成消耗了葡萄 糖，使谷氨酸的产率降低 ⑶选育不分解利用谷氨酸的突变株 为了积累谷氨酸，就必须使菌 种不能分解利用谷氨酸，这可通过 选育以谷氨酸为唯一碳源，菌体不 长或生长微弱的突变株来实现。 ⑷选育减弱乙醛酸循环的突变株 四碳二羧酸是由CO2固定反应和 乙醛酸循环所提供的。减弱乙醛酸循 环，CO2固定反应所占的比例就会增 大，谷氨酸的产率就高。这可通过选 育琥珀酸敏感型突变株、不分解利用 乙酸突变株、异柠檬酸裂解酶活力降 低菌株来实现。 ⑸阻止谷氨酸进一步代谢 由于细胞还可以谷氨酸为前体 继续向下合成谷氨酰胺等，就必然 会导致谷氨酸的积累量减少，为此 要避免谷氨酸被菌体利用，还需要 切断谷氨酸向下的代谢途径。 2.解除菌体自身的反馈调节 ⑴选育耐高渗透压突变株 要使菌种能高产谷氨酸,首先要 使菌种具备在高糖、高谷氨酸的培 养基中仍能正常生长、代谢的能力 即在高渗培养基中菌体的生长和 谷氨酸的合成不受影响或影响很小。 这可通过选育耐高糖、耐高谷氨酸 及耐高糖+高谷氨酸突变株来实现。 ⑵选育解除谷氨酸对谷氨酸脱氢酶反馈调节的突变株 当谷氨酸合成达到一定量时，谷 氨酸就会反馈抑制和阻遏谷氨酸脱氢 酶，使谷氨酸的