第五章酶分子修饰()概述.pptVIP

通过物理修饰，可以了解不同物理条件下，特别是在极端条件下（高温、高压、高盐、极端pH值等）由于酶分子空间构象的改变而引起酶的特性和功能的变化情况。 特点在于不改变酶的组成单位及其基团，酶分子中的共价键不发生改变，只是在物理因素的作用下，副键发生某些变化和重排。 回本章目录 热稳定性：一般来说，热稳定性有较大的提高。 抗原性：比较公认的是PEG和人血清白蛋白在消除酶的抗原性上效果比较明显。 各类失活因子的抵抗力：修饰酶对蛋白酶、抑制剂均有一定的抵抗能力，从而提高其稳定性。 回本章目录 半衰期：一般在体内的半衰期得到有效延长。由于酶分子经修饰后，增强对热、蛋白酶、抑制剂等的稳定性，从而延长了在体内的半衰期。 最适pH：大部分酶经化学修饰后，酶的最适pH发生了变化，这种变化在应用研究上有时具有重要意义。修饰酶最适pH更接近于生理环境，在临床应用上有较大意义。 Km的变化：大多数酶经修饰后，Vm没有明显变化，但有些酶经修饰后，Km值变大。 * * * * * * * * * 每分子核糖核酸酶与6.5分子的右旋糖酐结合，可以使酶活力提高到原有酶活力的2.25倍； 每分子胰凝乳蛋白酶与11分子右旋糖酐结合，酶活力达到原有酶活力的5.1倍 聚乙二醇是线性分子具有良好的生物相容性和水溶性，在体内无毒性、无残留、无免疫原性，并可消除酶的抗原性，使其末端活化后可以与酶产生交联，因而，它被广泛用于酶的修饰。 酶 半衰期 相对稳定性 天然SOD 6 min 1 右旋糖酐-SOD 7 h 70 Ficoll(低分子量)–SOD 14 h 140 Ficoll(高分子量)–SOD 24 h 240 聚乙二醇-SOD 35 h 350 PEG分子末端有两个可被活化的羟基，但化学修饰时多采用单甲氧基聚乙二醇（MPEG），只带一个可被活化的羟基。 酶的稳定性用酶的半衰期表示。所谓酶的半衰期是指酶的活力降低到原来活力一半时所经过的时间。例如，超氧化物歧化酶（SOD）可清除细胞外液中存在的超氧阴离子（ ），作为抗衰老和抑制炎症的药物，其稳定性及在体内的半衰期仅6~10min，影响了药用效果。 实验证明，用聚乙二醇或右旋糖酐、聚蔗糖分别对该酶Lys(赖)上的ε—NH2进行修饰后，分子量明显增大，SOD在血液中的半衰期可以从原来的6min增加到几h，最高达到35h。 酶蛋白从微生物、植物或动物中获得的。对人体来说是一种外源蛋白质，进入人体后，刺激体内产生抗体。产生的抗体可与作为抗原的酶特异地结合，使酶失去其催化功能。 消除抗原性公认的修饰剂是聚乙二醇（PEG）（Mr=500~20000D） 聚乙二醇（PEG）是线性分子，具有较好的生物相容性。在体内不残留、无毒性和抗原性，它的末端羟基经活化后可与酶反应产生交联。 通过酶分子修饰，使酶蛋白的结构发生改变，可以大大降低甚至消除酶的抗原性，从而保持酶的催化功能。 精氨酸酶——聚乙二醇修饰 采用一定的方法（一般为化学法）使酶蛋白的侧链基团发生改变，从而改变酶分子的特性和功能的修饰方法。 可以用于研究各种基团在酶分子中的作用及其对酶的结构、特性和功能的影响。在研究酶的活性中心中的必需基团时经常采用。 酶蛋白的侧链基团是指组成蛋白质的氨基酸残基上的功能团。主要包括氨基、羧基、巯基、胍基、酚基等。这些基团可以形成各种副键，对酶蛋白空间结构的形成和稳定有重要作用。侧链基团一旦改变将引起酶蛋白空间构象的改变，从而改变酶的特性和功能。 对非催化基团修饰可改变酶的动力学性质，改变酶对特殊底物的束缚能力。 经常被修饰的残基是： 亲核的Ser（丝氨酸）、Cys（半胱氨酸）、Met（蛋氨酸）、Thr（苏氨酸）、Lys（赖氨酸）、His （组氨酸） 亲电的Tyr（酪氨酸）、Trp(色氨酸) 对催化活性基团可以通过选择性修饰侧链成分来实现氨基酸的取代。 1．酰化及其相关反应 1．氨基修饰 天冬酰胺酶是一种抗白血病的药物，注入体内后很容易被代谢。用亚硝酸修饰天冬酰胺酶N—末端Ile (异亮)的氨基与肽链中Lys(赖)的ε—氨基，脱去氨基后，变成羟基，酶活力不变，但在体内的半衰期延长2倍，疗效显著提高。 用O—甲基异脲修饰溶菌酶，使酶分子中赖氨酸残基上的氨基与它结合，将氨基屏蔽起来，修饰后，酶活力基本不变，但稳定性显著起高，而且很容易形成结晶。 凡能使蛋白质侧链上的氨基发生改变的化合物，称为氨基修饰剂，主要有亚硝酸、二硝基氟苯、醋酸酐、琥珀酸酐、二硫化碳、乙亚胺甲酯。O—甲基异脲、顺丁烯二酸酐等。 氨基修饰剂可以使侧链氨基发生脱氨基作用，或者与氨基共价结合将氨基屏蔽起来。 2．羧基修饰