实验八 重金属离子胁迫下植物组织膜脂过氧化产物测定文稿.pptVIP

实验八 重金属离子胁迫下植物组织膜脂过氧化产物的测定 ——（MDA法） 一，实验目的与要求 掌握比色法测定植物组织MDA含量的方法和步骤； 观察重金属胁迫下植物组织膜脂过氧化的程度。 二，实验原理 　MDA是植物细胞膜脂过氧化反应的最终产物之一。 逆境胁迫导致自由基（O ·2 、OH ?等）积累，诱导细胞膜中的不饱和脂肪酸发生过氧化反应。 MDA的积累加剧对细胞的伤害。 MDA可与蛋白质、核酸等结合使之失去其活性, 从而进一步破坏了生物膜及细胞内物质的结构与功能, 最终导致植物受伤害, 甚至死亡。 在酸性和高温条件下，MDA可以与硫代巴比妥酸（TBA）反应生成红棕色的三甲氚，在532nm处有最大光吸收。 排除干扰： 蔗糖与TBA反应后，在450nm有最大光吸收，在532nm也有光吸收，通过公式排除干扰。 三，实验材料与试剂 材料 Cd 2+处理7d的菹草叶片； 试剂 10%三氯乙酸（TCA）； 0.6%硫代巴比妥酸（TBA）。 四，实验步骤 MDA的提取： 0.1g植物叶片洗净、擦干、剪碎，置于研钵中加少许石英砂、5mLTCA（分次），研磨匀浆后转移至离心管。4000 rpm离心10min，上清液即为样品提取液。 2，显色反应与测定 2mL提取液+2mL TBA，混匀，沸水浴15min，迅速冷却。 　　另取２mLTCA+2mLTBA同样操作，为对照液。 　　反应液3500rpm离心15min，取上清液，测量体积（Ｖ），以对照液调零，测定532nm、600nm、450nm处的光吸收值。 3，计算含量 MDA的浓度： 　Ｃ(μmol/L)＝6.45(A532-A600)-0.56A450 MDA的含量 含量( μmol/g FW) =2.5*C (μmol/L) *V(L)/M(g FW) * * *