专题五生化药品.分析.pptVIP

膜分离技术 * 第九章 生化药品概述 概 述 生化药物：从生物体分离、纯化所得的一类结构上十分接近于人体内的正常生理活性物质，具有调节人体生理功能，达到预防和治疗疾病目的的物质。 特点 来源于生物体 人体的基本生化成分 一、生化药品的分类 药物的化学本质 和化学特性分类 核酸及其降解物和衍生物类药物 酶类药物 多肽和蛋白质类药物 氨基酸及其衍生物类药物 糖类药物 脂类药物 二、生化药物的特点 1 1、原材料复杂 同一种生化物质的原料可来源于不同生物体 同一种物质也可由同种生物体不同部位产生 同一种生物体或组织可产生结构完全不同的物质及结构相似物质 2 3 胰岛素：猪、牛、人； 菘蓝：板蓝根、大青叶； 微生物：抗生素、蛋白质、酶等； 2、种类多、含量低 3、种属特性 红豆杉——紫杉醇含量0.003% 约从 38 000棵树中方可分离提纯得 到 99％纯度的紫杉醇约 25kg 小 大 与人胰岛素结构相似性 高 低 抗原性 高 低 活性 牛胰岛素 猪胰岛素 4、活性与空间构象有关 5、制备要求高 高营养、低含量、特殊生物活性等决定 三、传统生化制药的一般工艺过程 生物材料的选取与预处理 提取有活性部分 有效成分的分离与纯化 制剂 1、材料的选择与保存 原则：选择富含所需目的物、易于获得、提取的 无害生物材料 1、材料的选择与保存 一、材料的选择 1、来源：来源丰富、尽量不与其他产品争原料、 最好能一物多用，综合利用。 2、杂质：难于分离的杂质会增加工艺的复杂性 严重影响收率、质量和经济效益 。 SOD 植物 血液 一、材料的选择 3、有效成分的含量 （1）合适的生物品种：催乳素，哺乳动物 （2）合适的组织器官 ： （胃蛋白酶，胃） （3）生物的生长期：胸腺素，幼龄动物 （4）合适的种属：人，猪 （5）合适的生理状态：胰岛素，饭后 二、材料的采集与保存 生理活性物质易失活与降解，采集时必须保 持材料的新鲜、防止腐败、变质与微生物污染。 采摘必须新鲜、快速、及时速冻、低温保存 速冻、冻干、有机溶剂脱水等 1、天然生物材料的保存 2、动物细胞的保存方法及影响保存质量的因素 保存方法 组织块保存法 细胞悬液保存法 单层细胞保存法 低温冷冻保存 影响保存质量的因素： a、冻存速度：缓慢降温、加速融化 b、保护剂：甘油/二甲亚砜 c、冻结方法：收集细胞+保护剂+低温 d、细胞复苏：融化+培养液 2、生物材料的预处理 一、组织与细胞的破碎 物理法 化学法 生物法 磨切法 压力法 震荡法 冻融法 组织自溶法 酶解法 噬菌体法 渗透压法 高压法 减压法 二、细胞器的分离 为获得结合在细胞器上的一些生化成分或酶 系，常常要先得到细胞器再进一步分离有效成分。 方法：匀浆破碎细胞，离心分离（差速/密度梯度） 3、生物活性物质的提取 提取是利用制备目的物的溶解特性，将目的物与细胞的固形物成分或其它结合成分分离，使其由固相转入液相或从细胞生理状态转入特定溶液环境的过程。 浸渍法：用冷溶剂溶出固体材料中的物质 浸煮法：用热溶剂溶出目的物 一、提取方法的选择 目的物与杂质在溶解度与稳定性方面的差异 选择合适的溶剂系统与提取条件 除去与目的产物性质差异较大的杂质、浓缩目的物 注意事项：酶类 辅酶丢失和其他失活因素 蛋白质类 高级结构的破坏 多肽及核酸类 酶水解、抑制剂 脂类 氧化 二、生物活性的保护措施 采用缓冲系统：防止pH变化带来失活、提取效率下降 磷酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液等 添加保护剂：保护酶活性中心及某些活性基团 还原剂、金属螯合剂、适量底物等 抑制水解酶的作用：ETDA、热变性、pH值、抑制剂 其他保护措施：根据目的物不同性质具体对待 温度、紫外线、强酸碱、氧化剂等 三、影响提取的因素 1、温度 提取温度 ↑溶解度 ↑ 温度↑ 物料的粘度↓，有利于分子扩散和机械搅拌 对不耐热的生物活性物质的提取，一般在0~10℃ 有机溶剂提取一般在较低温度下进行 2、酸碱度：抑制有害酶类的水解破坏作用，防止降 解，提高收率 中性：避免过酸或过碱及等电点，pH4~9 酸性：偏酸性介质（胰岛素等），破坏