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动物遗传学之动物转基因技术 壹 转基因动物的概念 贰 转基因动物的一般步骤 叁 导入基因的方法 肆 转基因动物的检测方法 伍 转入基因的选择与转基因动物的研究现状 陆 转基因动物的应用前景 壹 转基因动物的概念 1980年，Gordon应用显微注射法首次成功地将重组的外源DNA直接注入小鼠受精卵雄原核中，获得了携带外源基因小鼠。但缺乏启动子而不能表达。 转基因技术：是把已知基因转移到真核细胞，并整合到基因组中得到稳定表达的技术。是DNA重组技术发展而来。 转基因动物：凡是带有外源基因的动物。 转基因动物技术：是将外源 基因或体外重组的基因结构转移 到动物的受精卵内，使其在动物 体内得到整合和表达，以产生具 有新遗传特征或性状的动物，并 能将新的遗传信息稳定地遗传给 后代，获得外源基因系或转基因 群，或者是外源基因在特定调控 元件的作用下在某些宿主组织中 进行独立的复制，并在一定时间 内表达外源蛋白（生物反应器）。 贰 转基因动物的一般步骤 1、目的基因克隆和体外重组 1）人工合成 2）互补DNA（cDNA）的克隆 3）DNA克隆 2、外源基因的导入 将目的基因转入→培养→产下后代 3、外源DNA整合、转录及表达的分子检测 是否转基因动物 叁 导入基因的方法 一.显微注射法 二.精子载体法 三.胚胎干（ES）细胞介导法 四.染色体片段显微注射法 一.显微注射法 显微注射法是通过显微操作仪将外源基因直接注射到受精卵的原核中，该法是产生最早且又最为有效的转基因方法 。 二.精子载体法 精子载体法是精子和外源DNA混合培养时，外源DNA可直接进入精子的头部，通过受精将外源基因引入动物细胞中。外源DNA导入精细胞的方法有DNA与精子共育法、点穿孔导入法、脂质体转染法。 三.胚胎干（ES）细胞介导法 胚胎发育卵泡阶段的细胞能在培养基中体外增殖，当把他们重新输回胚胎胚泡后，仍保留着分化成其他细胞（包括生殖细胞）的能力，这些细胞称为多效性胚胎干细胞（ES）。 ES在体外培养时可承受转基因操作而不影响其分化多效性，外源基因通过同源重组方式特异性整合在ES基因组内的一个非必需位点上，构成工程化胚胎干细胞。 工程化胚胎干细胞经筛选鉴定和体外扩增，再输回小鼠胚胎胚泡中，最终形成转基因动物。 四.染色体片段显微注射法 染色体介导法是指人或动物染色体上割取特定的染色体片段（M期）或分离出来之后，以其为媒介将外源基因注入动物早期胚胎中，以获得外源DNA的动物，严格地讲称为转染色体动物。通常采用离心分离法或流式细胞仪（flow cytometry）分离法分离染色体。 肆 转基因动物的检测方法(以转基因鼠为例) 雌鼠受精12h后分离受精卵，在体外将加工好的外源基因注射到受精卵原核中，然后再移植到假孕母鼠的输卵管中，待幼鼠出生采取DNA。将制备好的DNA样品点到带尼龙膜上，再用所注射的基因做成探针，做斑点杂交(DNA层面)，检测带外源基因的小鼠。然后采血或外源基因表达的器官组织制备RNA。用外源基因作为探针与制备的RNA进行Northern分子杂交（RNA层面），检测外源基因是否转录成mRNA。接着对带外源基因的小鼠进行放射免疫测定，以检测外源基因合成的蛋白质（蛋白质层面）。 伍 转入基因的选择与转基因动物的研究现状 一.转基因的选择 1.与机体代谢调节有关的蛋白基因（生长激素基因） 2.抗性基因.抗逆，抗病 3.经济性状的主效基因 4.治疗人类疾病所需的蛋白基因. 二.转基因动物的研究现状 1.提高动物生长.生产性能的研究 如：带牛生长素的猪，猪生长快个体大饲料利用率高 2.改变奶蛋白成分和性质的设想 如：奶牛的奶酪产量与k酪蛋白的含量直接相关，转入一个超量表达的k酪蛋白基因 3.利用家畜生产药物蛋白的研究 如：人的血红蛋白基因转入猪获得成功，所得的转基因猪血液中表达了人的血红蛋白 陆 转基因动物的应用前景 自20世纪80年代第一只转基因小鼠诞生起，人类就开始了对转基因动物的研究。随着研究的不断深入和实验技术的不断完善，有些转基因动物的成果已进入实用化和商业化的开发阶段。目前，转基因动物主要应用于医药、食品、生产等各个方面。 异体器官移植 器官移植是目前治疗器官功能衰竭等疾病的首选技术，为患者带来希望，利用转基因动物可以在动物体上培育人体器官，有效缓解器官供需日益突出的矛盾。 巨型鲑鱼 许多动物的生长速度取决于体内生长激素的含量。我们可以用转基因技术往动物体转入生长激素基因，用此方法培育的转基因鲑鱼，在同一生长期内，平均重量是普通鲑鱼的11倍，成熟期也比普通鲑鱼快1倍。 我国首例富含鱼油转基因克隆