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染菌及无菌技术 1.染菌的原因，染菌对发酵造成的影响 染菌的原因： （1）、设备渗漏 ：设备渗漏包括夹套穿孔、盘管穿孔、接种管穿孔、阀门渗漏、搅拌轴渗漏、罐盖漏和其它设备漏等。 （2）、空气带菌：空气除菌系统较为复杂，环节多，偶遇不慎便会导致空气除菌失败。 （3）、种子带菌 ：种子带菌又分为种子本身带菌和种子培养过程中染菌。加强种子管理，严格无菌操作，种子本身带菌是可以克服的。 （4）、灭菌不彻底：灭菌技术的好坏与灭菌质量很有关系例如蒸汽总压是否达到要求标准 （5）、技术管理不善：技术管理就是要对发酵每个环节严格控制，发酵中稍有不慎就可能染菌 染菌对发酵过程的影响： 发酵过程污染杂菌，会严重的影响生产，是发酵工业的致命伤。 （1）、造成大量原材料的浪费，在经济上造成巨大损失，扰乱生产秩序，破坏生产计划 （2）、杂菌大量消耗营养干扰生产菌的正常代谢；改变pH，降低产量，降解某些产物。 （3）、污染不同的微生物，不同阶段染菌危害：污染噬菌体后，可使发酵产量大幅度下降，严重的造成断种，被迫停产。有些杂菌会使生产菌自溶产生大量泡沫，即使添加消泡剂也无法控制逃液，影响发酵过程的通气搅拌。发酵前期最易染菌，且危害最大。发酵中期染菌会严重干扰产生菌的代谢。有时甚至会使已产生的产物分解。有时也会使发酵液发臭，产生大量泡沫。 、杂菌污染对发酵产物提取和产品质量的影响 2.检查设备渗漏的方法。 （1）、水压试漏法。即被测设备的出口处装上压力表，将水压入设备，待设备中压力上升到要求压力，关闭进出水，看压力有否下降。压力下降则有渗漏。但有些渗漏很小，看不出何处漏水，可以用稀碱溶液压入设备，然后用蘸有酚酞的纱布揩，只要酚酞能变红处即为渗漏处。 （2）、阀门渗漏可以用集气桶来试漏。方法是先在集气桶中装满水，然后关闭所有阀门，向发酵罐中通入空气，使罐压上升到要求压力，一般一公斤以上。由于集气桶连通各管道，观察哪根管子冒泡，即这根管子的阀门漏气。 3.连续灭菌、分批灭菌的概念、区别、工艺 连续灭菌就是将配制好的培养基向发酵罐等培养装置输送的同时进行加热、保温和冷却等灭菌操作过程。 连续灭菌也叫连消，就是将配制好的并经预热（60～75℃）的培养基用泵连续输入由直接蒸汽加热的加热塔，使其在短时间内达到灭菌温度（126～132℃）。然后进入维持罐（或维持管），使在灭菌温度下维持5～7分钟后再进入冷却管，使其冷却至接种温度并直接进入已事先灭菌（空罐灭菌）过的发酵罐内。其过程均包括加热、维持和冷却等灭菌操作过程。培养基的冷却方式有喷淋冷却式、、薄板换热器式几种方式。 分批灭菌就是将配制好的培养基放入发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程，也称实罐灭菌。分批灭菌是中小型发酵罐常用的一种灭菌方法。 连续灭菌工艺：喷淋冷却连续灭菌流程 配料罐：预热需要灭菌的料液至60-70°，以避免高温蒸汽与料液由于温差过大接触时发生水气撞击声）； 加热塔：连消塔，其作用主要是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液的温度很快（20-30s)升高到灭菌温度(126-132°）， 维持罐：连消塔加热时间很短，光靠这段时间进行灭菌是不够的，维持罐的作用是料液在灭菌温度下保持5-7min;以达到灭菌的目的。 冷却管：从维持罐出来的料液需要经过冷却管喷淋书进行冷却后才能输送到预先灭菌的发酵罐内。 比较： 连续灭菌的优点：（适用于大型罐） 可采用高温短时灭菌，营养成分破坏少，有利于提高发酵产率； 发酵罐利用率高； 蒸汽负荷均衡； 采用板式换热器时，可节约大量能量； 适宜采用自动控制，劳动强度小； 可实现将耐热性物料和不耐热性物料在不同温度下分开灭菌，减少营养成分的破坏。 连续灭菌的缺点： 对小型罐无优势，不方便，对设备要求高； 蒸汽波动时灭菌不彻底； 当培养基中含有固体颗粒或有较多泡沫时，以分批灭菌好，防止灭菌不彻底。 分批灭菌的优点是不需要专门的灭菌设备，投资少，设备简单，灭菌效果可靠。 分批灭菌的缺点是发酵罐占用时间长，培养基的营养成分破坏程度较大。 连消与实消比较，它的优越性在于：培养基受热时间短，营养成分破坏少；发酵利用率高；使用蒸汽均衡，可避免用汽高峰，可采用自动控制，劳动强度低；可以回收60％～70％的蒸汽热量与冷却水量，因此容积为30立方米以上的发酵罐以采用连消工艺为好，对于容积较小的发酵罐，考虑到设备，操作因素和培养液浓度的稳定性，还是采用实消比较适宜。 连消：连续灭菌 实消：实罐灭菌（实消）是指将配制好的培养基放入发酵罐或其他装置中，通入蒸汽将培养基和所用设备加热至灭菌温度后维持一定时间，再冷却到接种温度，也叫间歇灭菌、分批灭菌 空消就是没有放发酵液时，对整个罐体进行灭菌主要是消罐内的死角。在工业上一般连续化生产都采用空消，罐体和发酵液分别灭菌，