生物化学与分子生物学基因表达调控分析报告.ppt

2、特异转录因子 为个别基因转录所必需，决定该基因的时间、空间特异性表达。 SP1 CBF 特异转录因子 转录激活因子：增强子结合蛋白 转录抑制因子：沉默子结合蛋白 转录调节因子结构 DNA结合域 转录激活域 TF 蛋白质-蛋白质结合域 （二聚化结构域） 谷氨酰胺富含域 酸性激活域 脯氨酸富含域 转录因子含有不同的DNA结合域 螺旋-转角-螺旋是转录因子中的常见的DNA结合域 同源异型域结构 锌指结构是一类含锌离子转录因子的DNA结合域 亮氨酸拉链结构域既可介导结合DNA又可介导蛋白质二聚体化 碱性螺旋-环-螺旋结构域也可同时介导结合DNA和蛋白质二聚体化 Zinc-fingers 锌指 最常见DNA结合域之一 约有30个AA残基 其中4个AA残基 （2个Cys，2个His） 配位键 Zn2+ 锌指 与DNA双螺旋大沟结合 存在于多种真核转录因子 具多个锌指结构 四个氨基酸残基分别位于正四面体的顶角，与四面体中心的锌离子配位键结合，稳定锌指结构 Cys和His之间有12个氨基酸残基，其中数个为保守的碱性残基 1 2 3 4 5 6 7 8 9 蛋白质 图15-10 图15-11 一段肽链中每隔7个AA即有一个Leu 在α螺旋某一侧面每两圈出现一个Leu 亲水面：亲水AA组成 疏水面：Leu组成 （亮氨酸拉链条） 可形成二聚体（发挥作用） 亮氨酸拉链 螺旋-回折-螺旋 （helix-turn-helix，HTH） 同源异型域 （homeodomain，HD） 识别螺旋 DNA大沟 DNA小沟 螺旋1N－端 DNA大沟 螺旋3 碱性螺旋-环-螺旋结构也可调节DNA结合及蛋白质二聚体化 碱性螺旋-环-螺旋 （basic helix-loop-helix，bHLH） bHLH双体 DNA大沟 螺旋 螺旋 环 （三）mRNA 转录激活及其调节 polⅡ TFⅡH TAF TFⅡF TAF TAF TFⅡA TFⅡB TBP 真核RNA聚合酶Ⅱ在转录因子帮助下，形成的转录起始复合物 TATA DNA EBP 真核基因转录调节是复杂的、多样的 *不同的DNA元件组合可产生多种类型的转录调节方式； *多种转录因子又可结合相同或不同的DNA元件。 *转录因子与DNA元件结合后，对转录激活过程所产生的效果各异，有正性调节或负性调节之分。 四、转录后水平的调节 hnRNA加工成熟的调节 mRNA运输、胞质内稳定性的调节 IRE-BP对转铁蛋白受体mRNA稳定性的调节 低铁状态 转铁蛋白受体 mRNA 5’ 编码区 活化的IRE-BP 3’ Poly A n 翻译 TfR蛋白 IRE 高铁状态 转铁蛋白受体 mRNA 5’ 编码区 铁 失活的IRE-BP 3’ Poly A n mRNA降解 IRE 五、翻译水平的调节 （一）翻译起始因子-2的磷酸化调节蛋白质翻译 （二）RNA 结合蛋白参与翻译起始的调节 IRE-BP对铁蛋白mRNA翻译的调节 低铁状态 5’ 铁蛋白mRNA 活化的IRE-BP 编码区 3’ 翻译不能进行 高铁状态 5’ 铁蛋白mRNA 失活的IRE-BP 铁 编码区 3’ 翻译 （三）对翻译产物水平及活性的调节 四）siRNA与miRNA 700bp左右RNA前体 配对碱基 DICER 20~25bpmiRNA 5’ RISC 靶mRNA 未配对区域 靶mRNA降解 导入的双链RNA片段 siRNA RDE-1 DICER RISC RISC RISC 5’ 靶mRNA 靶mRNA被核酸内切酶切割 靶mRNA被核酸外切酶降解 miRNA 与siRNA使靶mRNA沉默机制 不同点 siRNA miRNA 机制性质与生物学意义 往往是外源引起的，抗病毒感染等异常情况。 是生物体自身的一套正常的调控机制，调节内源基因表达。 直接来源 长链dsRNA 发夹状pre-miRNA 分子结构 siRNA是双链RNA，3‘端有2个非配对碱基，通常为UU miRNA是单链RNA 作用机制 单链的siRNA结合到RISC复合物中，引导复合物与mRNA完全互补，通过其自身的解旋酶活性，解开siRNAs，通过反义siRNA链识别目的mRNA片段，通过内切酶活性切割目的片段， 成熟的miRNAs则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合，识别靶mRNA，并与之发生部分互补，从而阻遏靶mRNA的翻译。 作用位置 siRNA可作用于mRNA的任何部位 miRNA主要作用于靶标基因3′-UTR区 siRNA与miRNA的比较 六、RNA Pol Ⅰ、Ⅲ转录体系的调节相对简单 * 阻遏基因 mRNA 阻遏蛋白 I DNA z y a O P pol 没有乳糖存在时 乳糖操纵子被阻遏蛋白封闭 阻遏蛋白四聚体与操纵基因