色谱仪器要点解读.pptVIP

赵龙山 分析化学教研室 一、液相色谱仪器 三、流程及主要部件 流动相 进样器：平头进样器。 预柱：保护色谱柱。尤其是中药和生物样品，必须使用。可以反冲。 色谱柱：按照流动相流动方向安装。安装后检查是否漏，用滤纸（观察柱压）。要观察废液缸流出的流动相体积。 检测器：按照需要选择。 记录系统：按照需要选择。 色谱柱的选择 色谱柱的使用 流动相：高纯度、过滤、 pH范围、 有机溶剂与色谱柱匹配 互溶、并能溶解样品 净化样品 3. 使用保护柱：与色谱柱填料、内径一致避免色谱柱污染 紫外检测器不是通用型检测器，可以检测有∏键及非共用电子对的物质，如烯烃，芳烃以及含C＝O，C＝S，N＝O，N＝N基团的化合物，这些化合物在紫外区都有吸收。 有紫外吸收的物质可能有荧光。 选择最大激发和发射波长，提高灵敏度。 使用荧光衍生化试剂，测定没有荧光的物质。 适合于生物样品的测定。 示差折光检测器 （1）雾化　　液体流动相在载气压力的作用下在雾化室内转  变成细小的液滴，从而使溶剂更易于蒸发。 　（2）蒸发 　　 载气把液滴从雾化室运送到漂移管进行蒸发。  在漂移管中，溶剂被除去，留下微粒或纯溶质 的小滴。 　　（3）检测 　　溶质颗粒从漂移管出来后进入光检测池，并穿过激光光束。被溶质颗粒散射的光通过光电倍增管进行收集。 ※ 拧三圈！退一圈！ （二）检 测 器 检测器是高效液相色谱仪中的三大部件之一（高压输液泵、色谱柱、检测器），主要用于检测经色谱柱分离后的组分浓度变化。 检测器应具备如下特征： ①灵敏度高 ②对组分的响应速度快 ③响应对流动相流量和温度变化不敏感 ④不引起柱外峰展宽 ⑤线性范围宽；使用范围广 检测器 检测器的作用是将从色谱柱中流出的物质量的变化，转变成可供观测或检测的信号，通常为电压信号。该信号再通过记录仪、积分仪或色谱工作站等进行色谱数据处理。 对于液相色谱而言，由于待分离样品的所有组分均溶于流动相中而处于液相状态，样品与样品、样品与流动相之间各种物理性质接近，因此要寻找出一种即通用又灵敏的检测方法比较困难，至今为止检测器的技术问题仍然是HPLC中的薄弱环节。 HPLC中使用的检测器种类 1. 按检测器用途分类：检测器可分为通用型检测器（加和性质）和选择性检测器（溶质性质）。 通用型检测器是利用连续测定色谱柱流出物质某些具有普遍性的物理参数如折光指数、介电常数等而设计的检测器。根据吸馏液（样品与溶剂的混合物）与溶剂相同性质的差别检测被分析物质。这种检测器具有广泛的适用性，但灵敏度低，容易受外界因素如温度、流速、流动相组成等的影响，因此限制了使用范围。 选择性检测器是利用测定某些物质特有的性质如紫外吸收、荧光等而设计的检测器，一般来说其灵敏度要比通用型检测器的灵敏度高102～103倍或者更高，并且受外界因素包括流动相的组成变化影响极小或者没有，但是在使用上仅限于测定对检测器有相应的物质。 检测器 2. 按检测器测量性质分类：检测器可分为浓度型检测器和质量型检测器。 浓度型检测器是连续测定样品溶液的浓度变化，是反映总体性质的检测器，例如紫外、荧光 或示差检测器就属于此类。 质量型检测器是测量样品的总量，库仑、同位素或质谱检测器就属于这一类。 检测器 3. 按测量原理分类：检测器可分为光学检测器和电学检测器。 由于检测器是影响色谱中的薄弱环节，所以世界各国在研究开发方面投入了大量的精力和财力。从目前发表的文献统计数据来看，光学检测器（包括紫外、示差、荧光检测器等）的应用占绝对多数，随着二极管阵列检测器的推广和应用，这一比例还会增加。其次发展速度较快的是电学型检测器（例如电化学、电导检测器等）。另外各国也正在积极地开展HPLC与IR、MS、NMR等的联用技术。 检测器 HPLC检测器的性能指标 噪声与基线漂移 灵敏度 检测限（定量限） 线性范围 定性定量重现性 检测器的池体积 各类HPLC检测器介绍 紫外检测器（UVD） 紫外检测器是高效液相色谱仪使用最广泛的一种检测器，它分为： 1.固定波长紫外检测器 2.可变波长紫外检测器 3.光电二极管矩阵检测器 1.固定单波长式紫外检测器 光源：低压汞灯 检测波长：固定于254nm 灵敏、稳定、方便、经济 检测器结构（可变波长检测器） 可变波长检测器采用氘灯作光源，波长在190～600nm范围可调。光源发出的光经过透镜聚焦在入口狭缝上，光透过狭缝经过反射到达光栅，光栅把190～600范围的光分成不同波长的单色光后，把某一波长的单色光