玉山黑猪ESR基因和FSH-β基因多态性及相关性状的研究重点解读.doc

玉山黑猪ESR和FSH-β基因多态性及相关性状的研究 万明春1 周泉勇1 霍俊宏1 李小光2 （1.江西省农业科学院畜牧兽医研究所，南昌 330200；2.江西省玉山黑猪原种场，玉山334700） 母猪的繁殖性能一直是育种工作者关注的焦点之一，如产仔数就是一个重要的经济性状，但产仔数的遗传力很低(约为0.1)，通过传统的育种方法对该性状的改良收效甚微。标记辅助选择(marker assited selection，MAS)能在短时间内显著提高低遗传力性状，缩短选育进程。分子生物技术的快速发展为MAS育种在动物实际育种工作中的应用提供了保障，而且近些年来获得了较好的效果。雌激素受体基因(EsR)和卵泡刺激素p基因(FSH-β)等，是与繁殖性能有关的主效基因。这些主基因在大白、长白、杜洛克、二花脸、东北民猪、金华猪、香猪、荣昌猪、莱芜黑猪等品种中都有相关研究报道，但尚未见在玉山黑猪中的报道。 玉山黑猪是江西省唯一列入国家畜禽遗传资源保护名录的地方猪资源，其以肉质鲜美著称，六七十年代曾作为贡品专供中南海，为中央领导及国际要人享用。现对玉山黑猪FSH-β基因多态性和ESR基因进行Pvu II酶切多态性及其对繁殖性能的影响进行分析，旨在从分子水平上研究玉山黑猪繁殖性能，为玉山黑猪品种资源的保护和合理开发利用提供科学依据。 1 材料与方法 1．1 材料 本研究共采集120头玉山黑猪核心育种群母猪耳组织，样品来自江西省玉山黑猪原种场。采集耳组织置于装有70％的酒精试管中，用装有冰袋的泡沫箱带回实验室，-2O℃冰箱保存备用，在江西省农科院畜牧兽医研究所实验室开展PCR检测。试验样本的繁殖记录数据记录由江西省玉山黑猪原种场提供。 1．2 DNA的提取 采用苯酚一氯仿一异戊醇抽提方法提取DNA，用I×TE稀释至25 ng／L浓度，置于4℃的冰箱中保存备用。 1．3 引物的合成 ESR基因的引物参照Short[1]等所报道的序列，FSH-β基因的引物参照赵要风[2]等所发表的序列，2者引物都由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。ESR基因上游引物：5-CCTGTTTTTACAGTGACTTTTACAGAG一3 ，ESR基因下游引物：5 一CACTTCGAGGGTCAGTCCAATTAG-3 ；FSH-β基因上游引物：5 一CCTTTAAGACAGTCAATGGC一3 ，FSH一β基因下游引物：5 一ACTGCTCTATTCATCCTCTC一3 。 1．4 PCR反应体系及酶切 ESR基因的PCR反应体系：PCR扩增的反应总体积为25μL，其中10×buffer 2.5μL(含Mg2+ )，10mMdNTP 0.6μL，前、后引物各50 ng，DNA模板1μL，5 U／μL的TaqDNA聚合酶0.2 μL，ddH20补足至25 μL。PCR反应条件：95℃预变性5 min，94℃变性1 min，56℃退火45 s，72℃延伸30 s，72℃保温8 min，共进行33个循环。用PvuⅡ酶1.0μL，12.5μLPCR产物，bufer 2.0 μL，ddH20 1.5μL，37℃酶切3.5h后，再用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳。 FSH-β基因的PCR反应体系：PCR扩增的反应总体积为25μ L，其中10×buffer 2.5 μL(含Mg2+ )，10 mMdNTP 0.5μL，前、后引物各50 ng，DNA模板1μL，5 U／μL的TaqDNA聚合酶0.2 μL，ddH20补足。PCR反应条件：95℃预变性5 min，94 ℃变性1 min，55℃退火45 s，72℃延伸30 s，72℃保温8 min，共进行33个循环。直接用PCR产物进行2％琼脂糖凝胶电泳。 1．5 PCR产物酶切及带型判定 (1)ESR基因含3种基因型，分别为AA(1条带：120 bp)、AB(3条带：66 bp、54 bp、120 bp)、BB(2条带：66 bD、54 bp)。 (2)FSH-β基因的基因型，分别为AA(1条带：500 bp)、AB (2条带：500 bp，218 bp)、BB (1条带：218bp)，见图1. 500bp 216bp AB AA AA BB BB AA BB AB 图1 玉山黑猪FSH—β基因位点PCR扩增片段电泳图谱 表1 玉山黑猪新品系ESR、FSH-β基因的基因型频率及基因频率 基因座位 基因型