菌种复活传代保藏销毁操作规程.docVIP

1.目的 规范菌种复活、传代、保藏、销毁标准操作。 2.范围 适用于本公司检定菌的复活、传代、保藏、销毁。 3.职责 质量部生化检验员按本规程进行操作。 4.程序 4.1 冷冻菌种的复活 清洁安瓿（可用75%乙醇）后，用砂轮在安瓿上部划线，将安瓿掰开。用一无菌吸管吸取1～2ml适量的液体培养基（生孢梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基；金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌用营养肉汤；白色念珠菌、黑曲霉菌用液体真菌培养基）滴加到安瓿中，轻轻旋转安瓿使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，再将安瓿内的菌液转移至相应的培养基试管中，根据菌种类型采用适宜的培养条件（细菌培养温度32.5℃±2.5℃，18～24h；真菌培养温度25.5±2.5℃，3～5d）下培养，观察培养基是否浑浊，浑浊说明菌种复活生长（如不浑浊，细菌应延长培养时间至7d以上，真菌应延长培养时间至14d以上，仍不浑浊，按相关规定灭菌处理，并且丢弃之前应灭菌处理并详细记录）。 4.2 菌种确认 用无菌接种环取上述培养物，在相应的培养基平板（营养琼脂、大豆胰蛋白胨琼脂）上或相应的细菌鉴别平板（如伊红亚甲蓝、麦康凯、十六烷基三甲胺、甘露醇高盐）上划线分离单个菌落，置适宜条件下培养（若该类微生物为厌氧菌，则培养条件应为厌氧条件）。以同样方法取真菌和酵母菌至SDA（萨布罗培养基）平板上或玫瑰红钠培养基平板上，23～28℃下培