菠萝皮中黄酮类物质抗氧化活性及其对酶抑制作用的研究技术分析.doc

09025 菠萝果皮黄酮抗氧化活性及其对黄嘌呤氧化酶抑制作用研究 卢湾高级中学 李臻 指导老师 詹琪芳 摘要：[目的]：测定菠萝果皮黄酮的抗氧化活性及其对黄嘌呤氧化酶的影响；[方法]：用乙醇分别提取菠萝果皮、果肉总黄酮并用薄层层析法鉴定黄酮单体；DPPH法检测菠萝果皮总黄酮的抗氧化活性；黄嘌呤氧化酶抑制实验测定菠萝果皮总黄酮的抑制作用；[结果]：菠萝果皮总黄酮含量为5.73mg/g，菠萝果肉总黄酮含量为4.34mg/g；菠萝果皮黄酮单体主要为槲皮素、杨梅素和芦丁，菠萝果肉黄酮单体主要为槲皮素、杨梅素、异鼠李素和芦丁；菠萝果皮、果肉黄酮对DPPH自由基的清除率随浓度的增大而增强，在同等浓度下，菠萝果皮黄酮的清除作用强于果肉黄酮，浓度为8mg/ml清除率达最大值，其中，果皮黄酮对DPPH自由基的清除率为79.04%，高于果肉黄酮的65.71%；菠萝果皮黄酮在高、中、低三种浓度（10.0，1.0，0.1mg/L）下均能极显著抑制黄嘌呤氧化酶的活性（P＜0.010.1mg/L 菠萝果皮黄酮的抑制率为13.9%，与别嘌呤醇相比具有显著性差异（P＜0.05）；[结论]：菠萝果皮总黄酮含量多于菠萝果肉中的含量；菠萝果皮黄酮具有抗氧化活性，对黄嘌呤氧化酶有显著抑制作用，可能对痛风有预防和治疗的功效。 关键词：菠萝果皮；黄酮；抗氧化；黄嘌呤氧化酶 菠萝原名凤梨。味甘性温，具有解暑止渴、消食止泻之功。我国菠萝产量居世界第三[1,2]，除鲜食外，大量的菠萝用于加工罐头，而生产过程中占果重约50%~60%[3]的菠萝果皮被丢弃，既造成资源浪费，又污染环境。据文献报道，菠萝果皮和果肉中均含有黄酮[4,5,6]。黄酮是以苯色酮环为基础结构的化合物，广泛存在于植物中，具有抗氧化、抗菌消炎、抗病毒、增强身体免疫力等多种生物活性[7,8]。 痛风是由于体内嘌呤代谢障碍，导致代谢产物尿酸沉积于骨骼、关节等引起的疾病。近年来，随着我国生活水平的提高，受饮食结构和生活习惯等因素影响，痛风的发病率逐年上升，且呈发病低龄化的态势，给患者带来了极大的痛苦。研究表明，黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）与痛风的发生密切相关是参与痛风发生与发展过程中的关键酶是开发抗痛风药物的重要靶标通过抑制能够有效降低血浆尿酸水平可用于预防和治疗痛风。[9]，若能找到新的药物或前体物，意义重大。本课题要探讨的就是菠萝果皮中的黄酮能否抑制XO的活性，为废弃资源菠萝果皮的深入开发、实现经济和环境的双赢，提供理论依据。 1材料与方法 1.1材料与试剂 市售菠萝、芦丁、亚硝酸钠（NaNO2）、硝酸铝（AL(NO3）3）、氢氧化钠（NaOH）、蒸馏水、1，1-二苯基苦基苯肼（1，1-Diphenyl-2-picryl-hydrazy，DPPH，美国Sigma公司）、乙醇、黄嘌呤氧化酶（Sigma 公司）、黄嘌呤（上海制药厂）、别嘌呤醇（上海延安制药厂）。 1.2实验仪器 721型分光光度计（上海第三分析仪器厂），RE-52GA 型旋转蒸发仪（上海博通经贸公司），SHB-III循环水式真空泵，JA2003N电子天平。 1.3实验方法 1.3.1芦丁标准曲线绘制 本实验采用亚硝酸钠-硝酸铝分光光度法对提取液黄酮含量进行测定，通过与芦丁标准曲线的吸光度进行对比，得到提取液内黄酮含量，计算出提取率。称取芦丁标准品10mg，用30%的乙醇定容50ml容量瓶中，摇匀，得到浓度为0.2mg/ml的芦丁标准溶液。准确吸取芦丁标准溶液0、1、2、3、4、5ml，移入10ml刻度比色管中，加入30%乙醇溶液至5ml，各加5%亚硝酸钠0.5 ml,振摇后放置15min，加入10%硝酸铝溶液0.3ml摇匀放置15 min，加1.0mol/L的氢氧化钠溶液2ml，用30%乙醇溶液定容至刻度。摇匀，放置45min，以30%乙醇溶液为空白对照,于510nm波长处测定标准芦丁的吸光值。以标准芦丁浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制标准曲线，得到芦丁浓度-吸光值回归方程及芦丁标准曲线，见图1。 1.3.2总黄酮提取及含量测定 采用乙醇提取法提取菠萝总黄酮。分别取一定量的菠萝果肉及果皮进行烘干并粉碎，过40目筛。分别取20g菠萝果肉粉和菠萝果皮粉，放置在1000ml、70%乙醇溶液中，80℃，水浴3小时后浓缩至100ml分别得到菠萝果肉和果皮的乙醇提取液A1和B1。将浓缩液离心(4000r·min-1，10minHPD826大孔树脂进行纯化，水洗脱，然后30%乙醇溶液洗脱，分别得到菠萝果肉和果皮黄酮提取液A2和B2。取A1，A2，B1，B2各1ml，按1.3.1方法操作，分别测定在510nm波长处的吸光度值。本实验采用芦丁含量表征试样中总黄酮含量，在测出样品的吸光度后，根据回归方程计算芦丁浓度，根据如下公式计算黄酮含量和得