不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程技术分析.docVIP

不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程 1.检验目的 不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。 2.检验方法 分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。 3.检验原理 让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。 4.标本要求 受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用 5.试剂 5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Lea、Leb、K、k、Fya、Fyb、Jka、Jkb等。每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。 5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：Cw、Kpa、Kpb、Jsa、Jsb、Lua、Lub、Xr/mina等。每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。 5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。 5.4.致敏红细胞（质控细胞）。 5.5.0.9%生理盐水。 5.6.Coombs微柱凝胶卡。 6.器材 试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。 7.操作程序 7.1.盐水介质法 7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。 7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。 7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于表1005-1中。如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。 表1005-1　红细胞血型筛选细胞反应格局表 序号 血型系 Rh-hr Kell Duffy Kill Lewis P MNSs Luth 基因 D C E c e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub Ⅰ R1R1 + + 0 0 + + + + 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 + Ⅱ R2R2 + 0 + + 0 0 + + + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + Ⅲ R1r1 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 0 + 0 + 0 0 + 0 + 试验结果（盐水法、抗球蛋白法、微柱凝胶法） Ⅰ R1R1 Ⅱ R2R2 Ⅲ R1r1 注：＋为阳性；0为阴性 7.1.4再取受检者血清2滴于标记有1～11的11支小试管中。 7.1.5.在11支小试管中分别加入11套2%～5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。 7.1.6.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中表1005-2　红细胞血型谱细胞反应格局表 序号 血型系 Rh-hr Kell Duffy Kill Lewis P MNSs Luth 基因 D C E c e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub 1 R1wR1 + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + + + + + + 0 + 2 R1R1 + + 0 0 + + + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 3 R2R2 + 0 + + 0 0 + + 0 + 0 0 + + + 0 + 0 0 + 4 r′r 0 + 0 + + + + + + + + 0 0 + + + + 0 0 + 5 r〞r 0 0 + + + 0 + + + 0 + + 0 0 + 0 + + 0 + 6 r r 0 0 0 + + + 0 + 0 0 + 0 + + 0 + 0 + 0 + 7 r r 0 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 + 8 Ror + 0 0 + + 0 + 0 0 + 0 0 + + + + 0 + 0 + 9 r r 0 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + + + 0 + 0 0 + 10 r r 0 0 0 + + + + 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + 0 + 11 r r 0 0 0 + + 0 + 0 + 0 + 0